[发明专利]一种基于NH2

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的基于NH₂-Cu-MOF的可视化检测血清中碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）合成NH₂-Cu-MOF纳米酶材料，包括如下步骤：

（1.1）先将Cu(NO₃)₂·3H₂O溶解在去离子水中， Cu(NO₃)₂·3H₂O和去离子水的质量比为1:10；

（1.2）将溶解有2-氨基对苯二甲酸的DMF溶液和乙醇混合后，加入步骤（1.1）的溶液中，混合均匀；

DMF和乙醇溶剂的体积比为1:1，Cu(NO₃)₂·3H₂O和2-氨基对苯二甲酸的质量浓度比为2:1-3:1；

（1.3）充分混匀后，将溶液置于特氟龙衬里的高压釜中，在80°C-90°C下反应；

（1.4）最后，通过离心收集NH₂-Cu-MOF，并用DMF、乙醇和去离子水依次洗后自然烘干，合成NH₂-Cu-MOF纳米酶材料；

（2）利用NH₂-Cu-MOF纳米酶和琼脂糖制备检测碱性磷酸酶活性的凝胶检测管，包括如下步骤：

（2.1）先将琼脂糖溶于沸水中制得琼脂糖凝胶溶液，琼脂糖质量浓度为5g/L-15g/L；

（2.2）将NH₂-Cu-MOF纳米酶的溶液加入到琼脂糖凝胶溶液中，混匀，其中，NH₂-Cu-MOF纳米酶浓度为0.3-0.6g/L；

（2.3）混匀后，取体积为0.050-0.250mL混合液到测试管的盖子里，放置5 min后凝胶凝固，盖上盖子，在4℃下储存；

（3）检测时，首先绘制凝胶颜色随碱性磷酸酶活力大小变化的工作曲线，将不同活力大小的碱性磷酸酶标准溶液、67μL ppi溶液加入到凝胶测试管中，正立放于37°C恒温培养振荡器中孵育30 min，然后加入80μL OPD溶液，倒立置于37°C恒温培养振荡器中孵育40 min，在紫外灯下拍照，使用ColorSchemer Studio软件读取照片中溶液的RGB值，计算空白溶液和待测液的R /(R+G+B)，并以△R /(R+G+B)值作纵坐标，即可得到凝胶颜色的△R /(R+G+B)值随碱性磷酸酶活力大小变化的变化曲线，即检测血清中碱性磷酸酶活力的工作曲线；

其次，对实际样进行检测：吸取60 μL的血清、67μL ppi溶液加入到凝胶测试管中，正立置于37°C恒温培养振荡器中孵育30 min，而后加入80μL OPD溶液，倒立置于37°C恒温培养振荡器中孵育40 min，在紫外灯下拍照，可得颜色变化；使用ColorSchemer Studio软件读取照片中溶液的RGB值，代入工作曲线中即可得到血清中碱性磷酸酶的活力值。