[发明专利]一种基于小麦黄条纹病毒G蛋白的多克隆抗体、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于小麦黄条纹病毒G蛋白的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：以小麦黄条纹病毒G蛋白为免疫原通过大肠杆菌原核系统表达重组蛋白，纯化后得到的G蛋白抗原通过皮下多点注射新西兰大白兔制备得到多克隆抗体；

所述重组蛋白表达是将含有经密码子优化的小麦黄条纹病毒G蛋白重组质粒转入到大肠杆菌DL21原核系统中进行表达；

所述重组质粒是将含小麦黄条纹病毒G蛋白中第115至1828nt的核苷酸经密码子优化并添加有酶切位点、His标签以及终止密码子，按NdeI--(WYSV-G)--His tag--Stopcodon—HindIII的顺序合成基因，利用无缝克隆技术将合成基因转入载体pET-30a中，合成基因的氨基酸的序列如SEQ ID No.1，所述的核苷酸的序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的方法，所述注射是将纯化后的可溶性G蛋白与完全弗氏佐剂乳化后，皮下多点免疫于新西兰雄兔，10天后进行第二次免疫，以后每隔一周加强免疫，加强免疫采用与不完全弗氏佐剂乳化，大腿肌肉注射方法；所述免疫后5d取少量血清，用间接ELISA测定抗体的效价，当效价达到l：100 000以上时，取血并分离血清，采用protein A-Sepharose affinity column从抗血清中提纯获得多克隆抗体anti-WYSV-G-IgG。

3.权利要求1-2任一所述的方法制备得到的小麦黄条纹病毒G蛋白多克隆抗体。

4.权利要求3所述所述多克隆抗体在WYSV病毒检测中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，所述检测的方法为斑点免疫杂交检测。

6.小麦黄条纹病毒的斑点免疫杂交快速检测试剂盒，包括上述小麦黄条纹病毒G蛋白多克隆抗体和酶标二抗。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，所述的酶标二抗为商品化的过氧化物酶HRP标记抗体，为羊抗兔IgG-HRP，其工作浓度为1:2000。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，还包括阳性质控对照、杂交膜、样品研磨液、洗膜液、封闭液以及显色液；所述的阳性质控对照为小麦黄条纹病毒G基因的原核表达蛋白；所述的杂交膜为尼龙膜或者硝酸纤维素膜；所述样品研磨液为0.05M碳酸钠包被缓冲液，pH＝9.6；所述洗膜液为1×PBS缓冲液，所述封闭液为含5％脱脂奶粉的PBS缓冲液，所述显色液为HRP-DAB底物显色液。