[发明专利]一种适用于EB病毒DNA提取的方法及提取试剂盒

权利要求书

1.一种适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)样品前处理：抽取2ml血液样品，注入到抗凝管中，立即颠倒混匀；离心后分离上清液得到上清血浆和下层物质，向所述上清血浆中加入裂解液Ⅰ和Proteinase K，混合均匀后温育消化，形成上清待提取液；向所述下层物质中加入红细胞裂解液，静置裂解后离心分离，弃去上清，然后用PBS洗去红色沉淀，剩余的白色沉淀用裂解液Ⅰ悬浮，温育消化，形成沉淀待提取液；

(2)裂解：将步骤(1)得到的所述上清待提取液和所述沉淀待提取液混合后加入裂解液Ⅱ，震荡混匀后离心，取上清液加入异丙醇，混合均匀，转移到已装入收集管的吸附柱中，吸附并离心后，取出所述吸附柱，倒掉所述收集管中的废液，并将所述吸附柱放回所述收集管中；

(3)DNA溶液收集：用洗涤液对步骤(2)所述收集管中的吸附柱进行洗涤，离心后弃去废液；再用无水乙醇进行洗涤，离心后弃去废液；将所述吸附柱进行继续离心后弃去废液，然后晾干；最后在吸附柱中间部位加入洗脱液或灭菌水室温孵育，离心后收集DNA溶液即可。

2.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述血液样品经4500rpm离心5分钟后，分离上清液得到上清血浆和下层物质，；所述裂解液Ⅰ的添加量为160ul/200ul所述上清血浆；所述Proteinase K的添加量为20ul/200ul所述上清血浆；所述Proteinase K的浓度为20mg/ml。

3.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(1)中，向所述上清血浆中加入裂解液Ⅰ和Proteinase K，混合均匀后60℃温育消化30分钟，消化完成后形成上清待提取液；向所述下层物质中加入等体积的红细胞裂解液，静置裂解30分钟后，1600rpm离心1分钟后分离，弃去上清；剩余的白色沉淀用裂解液Ⅰ悬浮，60℃温育消化30分钟，形成沉淀待提取液。

4.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述红细胞裂解液含0.155M氯化铵，0.1mM EDTA和10mM碳酸氢钾。

5.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(1)中，裂解液Ⅰ中含50mM Tris-HCl，50mM EDTA，20mM NaCl，1％vol SDS和200μg/mL Proteinase K。

6.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述上清待提取液和所述沉淀待提取液混合后加入等体积的裂解液Ⅱ，震荡混匀后12000rpm离心5min，取上清液加入等体积的异丙醇。

7.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述裂解液Ⅱ中含酚50％vol和50％vol氯仿和异戊醇，所述氯仿和异戊醇的体积比为24:1。

8.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(3)中，向吸附柱中加入500ul的洗涤液，12000rpm离心1分钟后弃去废液；再向吸附柱中加入750ul的无水乙醇，12000rpm离心1分钟，弃去废液，12000rpm离心2分钟；在吸附柱中间部位加入20-50ul的洗脱液或灭菌水，室温孵育2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存即可。

9.根据权利要求1所述的适用于EB病毒DNA提取的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述洗涤液为80％的乙醇溶液；所述洗脱液为洗脱液为TE缓冲液，TE缓冲液中含10mM Tris-HCl及1mM EDTA，溶液pH为8.0。

10.一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：成分为裂解液Ⅰ的A液，成分为裂解液Ⅱ的B液，成分为洗脱液的C液，成分为洗脱液的D液，成分为红细胞裂解液的E液，以及成分为Proteinase K的F液。