[发明专利]一种大鳞鲃精子保存液的使用方法在审
申请号: | 201811443735.6 | 申请日: | 2018-11-29 |
公开(公告)号: | CN109349271A | 公开(公告)日: | 2019-02-19 |
发明(设计)人: | 丁辰龙;江国荣;吴学军;李丽 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院宿迁农科所 |
主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02;A01K61/10 |
代理公司: | 宿迁市永泰睿博知识产权代理事务所(普通合伙) 32264 | 代理人: | 刘海莉 |
地址: | 223800 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 精液 精子保存液 雌鱼 大鳞 精子活力 受精率 受精 雄鱼 一次性抽取 常规操作 技术支撑 精液采集 精子寿命 人工授精 研究设计 保存液 规模化 精液量 精子 可用 离体 卵量 亲鱼 抽取 过量 挤出 养殖 | ||
1.一种大鳞鲃精子保存液的使用方法,其特征在于:包括以下步骤:
一、选择亲鱼:选取体质重1.44~1.82g, 体长为47.6~48.9 cm,性成熟良好的亲鱼;
二、精液采集:选取步骤一中健康、体表鳞片完整的性成熟雄鱼,进行腹部一次注射催产剂,注射催产剂的雄鱼放入水温为23-25℃暂养桶中催产,催产至10-14h时取精液,在精子离体被激活开始时间为0/S、 30/S、60/S、90/S时,记录精子活力状况,采精时,擦干待抽取精液鱼的生殖孔,轻压腹部,用1ml注射器抽取精液,抽取的精液放入容量为1mL的干燥离心管中,用湿纱布封口,以免精液干,抽取的精液呈乳白色,无血、尿、粪便和粘液的污染;
三、精子活力的测定:(1)将精子保存液与精液按比例 250:1倍稀释混合, 得精子混合液;(2)抽取5µl精子混合液,滴入载玻片上,使用10x10倍显微镜,以观察一个视野为准;(3)从精子保存液与精液相混合开始计算精子激烈运动的时间,精子激烈运动时呈“旋涡”状运动,精子分路线运动,精子快速运动是大约70%转入中速运动为主,50% 和30%时段,精子运动分别为速度缓慢和部分精子原地打颤,当视野中大约95%精子停止运动为寿命终止时间;
四、人工授精鱼受精率的测定:取雌鱼卵,按5.0万粒雌鱼卵,加1ml精液,将精液覆盖卵上,用干净羽毛将精液与卵搅拌均匀使其充分接触,立即精子保存液70ml, 迅速搅拌30-40秒后立即倒入孵化桶,流水孵化,微充气,受精卵发育至囊胚后期时统计受精率。
2.如权利要求1所述一种大鳞鲃精子保存液的使用方法,其特征在于:所述步骤二中精子保存液的制备步骤为:(1)称取分析纯试剂A,分析纯试剂A由80 g/L 的NaCl,4.0 g/L 的KCl, 1.2 g/L 的NaH2PO4, 0.6 g/L的 KH2PO4, 2.0 g/L 的MgSO4.7H2O4 组成;(2)称取分析纯试剂B,试剂B由1.0 g/L的MgCl2,3.5 g/L的NaHCO3, 10.0 g/L的葡萄糖,1.4 g/L的CaCl.H2O组成;(3)将母液试剂A和试剂B溶于1000 ml 的蒸馏水水中,按试剂母液与蒸馏水1:9的比例稀释成精子稀释保存液。
3.如权利要求1所述一种大鳞鲃精子保存液的使用方法,其特征在于:所述步骤二中催产剂为宁波生物制药三厂生产的鱼类催产激素,催产剂包括剂量为2 µg/Kg的促黄体释放激素(LRH-A2)、1mg/Kg的马来酸地欧酮(DOM)和200IU/Kg的绒毛膜促性腺激素(HCG)。
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