[发明专利]一种大鳞鲃精子保存液的使用方法

说明书

本发明公开了一种大鳞鲃精子保存液的使用方法，包括以下步骤：一、选择亲鱼；二、精液采集；三、精子活力的测定；四、人工授精鱼受精率的测定。本发明研究设计的精子保存液，使得精液离体60/S内，精子在保存液中具有较强的活力，在生产中可一次性抽取精液，并根据雌鱼卵量使用精液量，抽取的精液可用于多条雌鱼受精，此方法解决了雄鱼数量少，满足不了雌鱼受精的困惑，避免了鱼在人繁常规操作时，雄鱼精液挤出过量的浪费问题，显著增强精子活力、延长精子寿命、提高受精率，为大鳞鲃规模化养殖提供了技术支撑。

技术领域

本发明涉及淡水鱼类人工繁殖的技术领域，具体涉及一种大鳞鲃精子保存液的使用方法。

背景技术

大鳞鲃（Barbus capito）隶属鲤形目、鲤科、鲃属。该鱼具有耐盐碱、食性广、肉质好、生长速度快等优良性状。 2008年大鳞鲃引进的原种繁殖时，雌鱼17尾、雄鱼仅3尾。十几年来，大鳞鲃繁育群体雌雄比例约为3:1，在繁殖高峰期，常常出现雄鱼数量不够，精子成熟度较差的现象。精子的活力与受精率有密切的关系，为了得到高的受精率，精子必需有较强的活力。

发明内容

本发明是针对大鳞鲃群体雌雄比例失调的状况，在亲鱼繁殖高峰，由于雄鱼数量少，满足不了雌鱼受精的需要，影响了苗种产业化生产。研究设计出一种大鳞鲃精子保存液，该精子保存液，用于大鳞鲃受精过程，可以显著增强精子活力、延长精子寿命和提高受精率，为大鳞鲃规模化养殖提供技术支撑。

本发明的技术解决方案：

一种大鳞鲃精子保存液的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

一、选择亲鱼:选取体质重1.44～1.82g，体长为47.6～48.9 cm，性成熟良好的亲鱼；

二、精液采集：选取步骤一中健康、体表鳞片完整的性成熟雄鱼，进行腹部一次注射催产剂，注射催产剂的雄鱼放入水温为23-25℃暂养桶中催产，催产至10-14h时取精液，在精子离体被激活开始时间为0/S、 30/S、60/S、90/S时,记录精子活力状况，采精时，擦干待抽取精液鱼的生殖孔，轻压腹部，用1ml注射器抽取精液，抽取的精液放入容量为1mL的干燥离心管中，用湿纱布封口，以免精液干，抽取的精液呈乳白色，无血、尿、粪便和粘液的污染；

三、精子活力的测定：（1）将精子保存液与精液按比例 250：1倍稀释混合, 得精子混合液；（2）抽取5µl精子混合液，滴入载玻片上，使用10x10倍显微镜，以观察一个视野为准；（3）从精子保存液与精液相混合开始计算精子激烈运动的时间，精子激烈运动时呈“旋涡”状运动，精子分路线运动，精子快速运动是大约70%转入中速运动为主，50% 和30%时段，精子运动分别为速度缓慢和部分精子原地打颤，当视野中大约95%精子停止运动为寿命终止时间；

四、人工授精鱼受精率的测定：取雌鱼卵，按5.0万粒雌鱼卵，加1ml精液，将精液覆盖卵上，用干净羽毛将精液与卵搅拌均匀使其充分接触，立即精子保存液70ml, 迅速搅拌30-40秒后立即倒入孵化桶，流水孵化，微充气，受精卵发育至囊胚后期时统计受精率。

所述步骤二中精子保存液的制备步骤为：（1）称取分析纯试剂A，分析纯试剂A由80g/L 的NaCl，4.0 g/L 的KCl， 1.2 g/L 的NaH₂PO₄， 0.6 g/L的 KH₂PO₄， 2.0 g/L 的MgSO₄.7H₂O₄组成；（2）称取分析纯试剂B，试剂B由1.0 g/L的MgCl₂，3.5 g/L的NaHCO₃, 10.0g/L的葡萄糖,1.4 g/L的CaCl.H₂O组成；(3)将母液试剂A和试剂B溶于1000 ml 的蒸馏水水中，按试剂母液与蒸馏水1:9的比例稀释成精子稀释保存液。