[发明专利]一种调控转录激活因子以降低黄酒酵母尿素积累的方法

权利要求书

1.一种降低黄酒酵母尿素积累的方法，其特征在于，以黄酒酵母XZ-11为出发菌株，进行了MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1的改进，构建重组黄酒酵母JNZ01，通过在含雷帕霉素的体系中培养黄酒酵母JNZ01，将转录激活因子Gln3或Gat1定位于细胞核，调控氮代谢阻遏效应转录激活因子不受氮源条件影响，降低黄酒酵母发酵过程中尿素的积累；所述黄酒酵母JNZ01的基因组上分别融合表达GLN3、FKBP12或GAT1、FKBP12，并在质粒上融合表达SPT15、FRB；通过在含雷帕霉素的体系中培养该菌株，使FKBP12和FRB结合，使Gln3或Gat1在细胞核定位蛋白Spt15的作用下转移到细胞核。

2.一种构建尿素积累能力降低的黄酒酵母的方法，其特征在于，所述方法是以黄酒酵母XZ-11为出发菌株，进行了MATa,Δura3,Δtrp1,TOR1 S1972R,Δfpr1的改进，构建重组黄酒酵母JNZ01，在重组黄酒酵母JNZ01的基因组上融合表达GLN3、FKBP12，并在质粒上融合表达SPT15、FRB；通过在含雷帕霉素的体系中培养该菌株，使FKBP12和FRB结合，使Gln3在细胞核定位蛋白Spt15的作用下转移到细胞核；

或，在重组黄酒酵母JNZ01的基因组上融合表达GAT1、FKBP12，并在质粒上融合表达SPT15、FRB；通过在含雷帕霉素的体系中培养该菌株，使FKBP12和FRB结合，使Gat1在细胞核定位蛋白Spt15的作用下转移到细胞核。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)构建GLN3、FKBP12重组框和GAT1、FKBP12重组框；

(2)将GLN3、FKBP12重组框和GAT1、FKBP12重组框分别整合到重组黄酒酵母JNZ01基因组上GLN3和GAT1基因之后；

(3)消除CRISPR-Cas9系统质粒，分别得到重组黄酒酵母JNZ02和JNZ03；

(4)构建SPT15、FRB融合表达框；

(5)将SPT15、FRB融合表达框转化至重组黄酒酵母JNZ02和JNZ03中，得到重组黄酒酵母JNZ04和JNZ05；

(6)在重组黄酒酵母JNZ04和JNZ05的培养过程中，向培养基中添加雷帕霉素，诱导Gln3和Gat1定位于细胞核；

所述重组黄酒酵母JNZ01的构建方法为：以黄酒酵母XZ-11为出发菌株，敲除其FPR1基因，并突变TOR1基因编码的蛋白第1972位丝氨酸残基为精氨酸。

4.应用权利要求2或3所述方法构建的尿素积累能力降低的黄酒酵母，所述黄酒酵母在含雷帕霉素的培养基中能够促使FKBP12与FRB结合，使转录激活因子Gln3或Gat1在细胞核定位蛋白Spt15的作用下定位于细胞核。

5.权利要求4所述的黄酒酵母在食品领域的应用。

6.权利要求4所述的黄酒酵母在制备黄酒方面的应用。

7.一种应用权利要求4所述黄酒酵母的发酵方法，其特征在于，将所述黄酒酵母接种至含有雷帕霉素的发酵培养基中，于28～30℃发酵。

8.一种降低黄酒中尿素或EC含量的方法，其特征在于，以权利要求4所述的黄酒酵母作为发酵菌株进行发酵。