[发明专利]鉴别大西洋鲑和虹鳟的方法及特异性引物对

权利要求书

1.一种用于鉴别大西洋鲑和虹鳟的特异性引物对，其特征在于包括用于鉴别大西洋鲑的特异性引物对和用于鉴别虹鳟的特异性引物对；用于鉴别大西洋鲑的特异性引物对，由引物SS-5’和引物SS-3’组成，所述引物SS-5’和所述引物SS-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列1(5’-GTTCTAGCAGCAGGCATTACCATAC-3’)和序列2(5’-TCCGATGGCTATCATAGCTCAGAC-3’)；用于鉴别虹鳟的特异性引物对，由引物OM-5’和引物OM-3’组成，所述引物OM-5’和所述引物OM-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列3(5’-CTGGCAGCAGGCATTACTATGT-3’)和序列4(5’-GTAAAGTAAGCACGAGTGTCCACG-3’)。

2.一种用于鉴别大西洋鲑的特异性引物对，其特征在于由引物SS-5’和引物SS-3’组成，所述引物SS-5’和所述引物SS-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列1(5’-GTTCTAGCAGCAGGCATTACCATAC-3’)和序列2(5’-TCCGATGGCTATCATAGCTCAGAC-3’)。

3.一种用于鉴别虹鳟的特异性引物对，其特征在于由引物OM-5’和引物OM-3’组成，所述引物OM-5’和所述引物OM-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列3(5’-CTGGCAGCAGGCATTACTATGT-3’)和序列4(5’-GTAAAGTAAGCACGAGTGTCCACG-3’)。

4.权利要求1或2或3所述特异性引物对的应用，为如下a)-f)中任一种：

a)制备用于检测或辅助检测大西洋鲑和/或虹鳟的试剂盒；

b)检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有大西洋鲑和/或虹鳟；

c)制备用于鉴定或辅助鉴定大西洋鲑和/或虹鳟的试剂盒；

d)鉴定或辅助鉴定待测样品是否为或候选为大西洋鲑和/或虹鳟；

e)制备用于鉴定或辅助鉴定市售大西洋鲑和/或虹鳟的真伪性的试剂盒；

f)鉴定或辅助鉴定市售大西洋鲑和/或虹鳟的真伪性。

5.包含权利要求1或2或3所述特异性引物对的试剂盒，其特征在于还包括Taq DNA聚合酶、反应缓冲液或水。

6.一种检测待测样品是否含有或候选含有大西洋鲑和/或虹鳟的方法，其特征在于包括如下步骤：提取待测样品的总DNA作为模板，采用权利要求1或2或3所述特异性引物对进行PCR扩增，根据是否实现有效扩增以及扩增产物中的DNA片段，判断所述待测样品是否含有或候选含有大西洋鲑和/或虹鳟。

7.一种鉴定待测样品是否为或候选为大西洋鲑和/或虹鳟的方法，其特征在于包括如下步骤：提取待测样品的基因组DNA作为模板，采用权利要求1或2或3所述特异性引物对进行PCR扩增，根据是否实现有效扩增以及扩增产物中的DNA片段，判断所述待测样品是否候选为大西洋鲑和/或虹鳟。

8.一种鉴定市售大西洋鲑和/或虹鳟的真伪性的方法，其特征在于包括如下步骤：提取市售大西洋鲑和/或虹鳟的基因组DNA作为模板，采用权利要求1或2或3所述特异性引物对进行PCR扩增，根据是否实现有效扩增以及扩增产物中的DNA片段，判断所述市售大西洋鲑和/或虹鳟的真伪性。

9.根据权利要求6或7或8所述的方法，其特征在于所述扩增产物中含有230-260bp的DNA片段，则所述待测样品中是否含有或候选含有或候选为大西洋鲑；所述扩增产物中含有300-330bp的DNA片段，则所述待测样品中是否含有或候选含有或候选为虹鳟。

10.根据权利要求6或7或8所述的方法，其特征在于进行所述PCR扩增时，采用的扩增程序具体为：95℃预变性30s；94℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸45s；30个循环；72℃延伸5min；所述PCR扩增的体系为：总体积为20μl时，SYBR Premix Ex Taq II10μl，上游引物的终浓度0.4μM，下游引物的终浓度0.4μM，模板1μl，灭菌蒸馏水补齐20μl。