[发明专利]鉴别大西洋鲑和虹鳟的方法及特异性引物对

说明书

本发明公开了一种用于鉴别大西洋鲑和虹鳟的方法及其特异性引物对。大西洋鲑引物对由引物SS‑5’和引物SS‑3’组成，虹鳟引物对由引物OM‑5’和引物OM‑3’组成，均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列1‑序列4。采用大西洋鲑和/或虹鳟的特异性引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增，根据是否实现有效扩增以及扩增产物中的DNA片段，判断所述待测样品是否含有或候选含有大西洋鲑和/或虹鳟。本发明所述特异性引物对可混合使用，也可单独使用，能有效鉴别大西洋鲑和/或虹鳟样品，特异性强、快速、简便、通量高。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及鉴别大西洋鲑和/或虹鳟的方法及特异性引物对。

背景技术

三文鱼是“Salmon”的音译，原本指鲑科(salmonidae)、鲑属(Salmo)的大西洋鲑鱼(Salmo salar)。大西洋鲑于20世纪60年代在挪威人工养殖成功，目前已经成为世界性的养殖鱼类，主要以海水网箱的形式养殖生产商品鱼。随着养殖业的发展，部分商家也将太平洋鲑等鱼类当作“三文鱼”进行出售，如虹鳟。虹鳟(Oncorhynchus mykiss)，属于鲑科(Salmonidae)、大麻哈鱼属(Oncorhynchus)，自19世纪起在美国开始淡水养殖，我国曾从朝鲜、美国、日本等国多次引种，目前在20多个省市区都有人工养殖，是国内养殖范围较广的冷水鱼类。虹鳟多为淡水养殖，直接生食可能为人体健康带来潜在风险。因此，准确鉴别大西洋鲑与虹鳟就显得非常有必要。

传统分辨大西洋鲑和虹鳟的方法主要为看鱼肉纹路和鱼皮。普通两倍体虹鳟脂肪线相对大西洋鲑较细，而市场上淡水养殖的三倍体虹鳟，与大西洋鲑差异极小，靠整鱼可以区分，切块或切片后几乎无差别，难以通过肉眼分辨。随着分子生物学技术的发展，以聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)为基础的DNA分析成为进行物种鉴定的主流技术。例如，普通聚合酶链式反应法(使用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果)、荧光定量PCR、DNA条形码技术等。传统使用琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行检测的方法，结果模糊、分辨率差，灵敏度低，容易造成漏判和误判，加之琼脂糖凝胶电泳过程繁琐，费时费力，也不利用高通量鉴定筛选。荧光定量PCR克服了灵敏度的问题，但对设备和操作水平的要求较高，不能进行多个物种的同时鉴定，而且由于没有对扩增产物进行电泳检测，只是通过溶解曲线和Ct值判断扩增是否成功，容易受到假阳性的(非特异性扩增)和假阴性(模板浓度低导致扩增片段的量比较少)干扰，造成误判。DNA条形码技术虽然准确率高，但必须要对扩增产物进行测序，成本高且耗时较长。

因此，需要建立一种快速、准确、灵敏、高通量、低成本的分析方法，实现对市场上易混淆三文鱼品种快速有效的鉴别。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供鉴别大西洋鲑和/或虹鳟的方法及特异性引物对，有效得将大西洋鲑和虹鳟进行区分，快速、简便。

本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：

本发明提供一种用于鉴别大西洋鲑和/或虹鳟的特异性引物对，包括用于鉴别大西洋鲑的特异性引物对和/或用于鉴别虹鳟的特异性引物对。

用于鉴别大西洋鲑的特异性引物对，由引物SS-5’和引物SS-3’组成，所述引物SS-5’和所述引物SS-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列1(5’-GTTCTAGCAGCAGGCATTACCATAC-3’)和序列2(5’-TCCGATGGCTATCATAGCTCAGAC-3’)。

用于鉴别虹鳟的特异性引物对，由引物OM-5’和引物OM-3’组成，所述引物OM-5’和所述引物OM-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列3(5’-CTGGCAGCAGGCATTACTATGT-3’)和序列4(5’-GTAAAGTAAGCACGAGTGTCCACG-3’)。