[发明专利]一种编码F5基因突变体的核酸及其应用

说明书

本发明公开了一种编码F5基因突变体的核酸及其应用，属于基因工程技术领域。该突变体与野生型相比，具有c.587GT突变或c.5195CT突变或c.587GT和c.5195CT复合杂合突变，其编码的多肽的氨基酸序列具有p.Gly196Val突变或p.Ser1732Leu突变或p.Gly196Val和p.Ser1732Leu复合突变。通过检测该新突变体是否存在，可有效筛选出易患遗传性因子V缺乏症的生物样品，且本发明的检测方法快速、准确、高效。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种F5基因突变体及其应用。具体地，本发明涉及分离的编码F5突变体的核酸、分离的F5突变体多肽、含F5突变体核酸的重组细胞，以及筛选易患遗传性因子V缺乏症的生物样品的方法。

背景技术

遗传性因子V缺乏症是一种罕见的出血性疾病，患病率为百万分之一。该病症状可以首发于任何年龄开始，但严重患者通常在童年期即表现出症状。遗传性因子V缺乏症常常会导致鼻衄、淤青、皮下出血、牙龈出血、手术后长期或持续性出血、外伤或分娩时出血过多等。妇女缺乏凝血因子V时可有月经过多。严重患者关节腔积血、颅内出血风险、肺内出血、消化道出血风险明显增加，可能危及生命。

遗传性因子V缺乏症通常由F5基因突变引起，其编码了凝血因子V。该蛋白质在凝血系统中起关键作用，凝血系统是响应于血管受伤害后发生的一系列化学反应。引起因子V缺乏的F5基因突变阻止功能性凝血因子V的产生或者严重降低血流中蛋白质的量。患者血液中凝血因子V通常低于正常水平10％；最严重的不到1％。功能性凝血因子V的量减少阻止血液正常凝固，引起严重的异常出血。遗传性因子V缺乏症以常染色体隐性模式遗传，这意味着每个细胞中的F5基因的两个拷贝都具有突变。携带一个F5基因杂合突变的个体往往无明显临床出血症状。由于遗传性因子V缺乏症非常罕见，因此中国人遗传性因子V缺乏症的报道十分有限，具有诊断价值的致病位点较少。

因而，目前遗传性因子V缺乏症的致病基因的确定以及遗传性因子V缺乏症的检测方法仍有待深入研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种F5基因突变体，并提出一种能够有效筛选易患遗传性因子V缺乏症的生物样品的方法。

本发明是基于发明人的下列工作完成的：

出血性疾病是一类由于止血机制异常所致的疾病统称，疾病种类繁多，发病机制各异，包括血管壁异常、血小板异常、凝血因子数量及质量异常引起的凝血功能障碍、抗凝与纤溶异常等，其中遗传性凝血功能障碍疾病牵涉到的基因众多。为了提高出血性疾病的临床诊断效率，高通量的第二代测序技术应用越来越广泛。第二代测序通常是利用设计的DNA序列探针将目标基因或全基因组中的外显子区域捕获下来，然后针对每个外显子进行深度测序。利用该技术流程寻找出凝血功能障碍的致病基因已成研究热点。Janicki PK等(Janicki P K,Vaida S,Almondhiry H A B.Targeted Next-Generation Resequencingof F5 Gene Identifies Novel Multiple Variants Pattern in Severe HereditaryFactor V Deficiency[J].Case Reports in Genetics,2013(14):941684.)利用第二代测序技术在一个家系中发现了多个F5基因的致病突变，与患者孕期出血、流产等症状有关。由此可见，第二代测序技术在凝血功能障碍的临床诊断和机制研究中发挥了重要作用。

因而，发明人针对一名凝血功能障碍导致的消化道出血患儿及其双亲，采用福建福君基因生物科技有限公司提供的凝血功能障碍相关的24基因panel，通过目标区域捕获的高通量第二代测序技术，并联合Sanger测序验证的方法进行致病突变挖掘和验证，最终确定了遗传性因子V缺乏症的2个新致病突变位点——F5基因的c.587GT和c.5195CT突变，且c.587GT和c.5195CT的复合杂合突变导致了遗传性因子V缺乏症的发生。