[发明专利]一种基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组、用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及一种基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组、该引物组的用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法。其中，基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组，所述引物组包括两对引物，其中外引物为F1和R1，内引物为F2和R2，所述F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明的优点在于，本发明提供的基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组特异性好，利用该引物组制备的试剂盒特异性好、灵敏度高，最低可检测出10²CFU/mL的沙门氏菌；利用该引物组的检测方法用于检测沙门氏菌操作简单、成本低，可应用于临床、食品和复杂样品的准确灵敏的检测。

技术领域

本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及一种基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组、同时涉及该引物组的用途、利用该引物组制备的试剂盒及该使用试剂盒检测肠道血清型沙门氏菌的检测方法。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella spp.)是一大群寄生于人类和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌(G-)，是肠杆菌科中最常见的人畜共患型致病菌。目前已知的沙门氏菌血清型超过2500种，除了不到10种罕见的血清型属于邦戈尔沙门氏菌外，其余血清型都属于肠道沙门氏菌，因此几乎所有的沙门氏菌都能引起严重的食物中毒事件。入侵作用是沙门氏菌进入机体，引起机体患病主要的关键因素，有毒力的沙门氏菌能入侵小肠粘膜上皮细胞，并穿越细胞层进入血液体循环。世界卫生组织(WTO)将沙门氏菌列入具有严重危害和中等危害的食物传播性病原菌。据统计，目前世界上54％的食源性致病是由沙门氏菌引起的，位居于前列且在过去16年发病率从未降低。然而，引起沙门氏菌中毒的食品中，约90％是肉、蛋、奶等畜产品，是人们生活中极为常见并且必须的食品，沙门氏菌的污染严重影响着人们的生活。沙门氏菌是肠杆菌科中的一个重要菌属，是人和动物的常见食源性病原菌，可引起人患多种疾病，如菌血症、肠热症、食物中毒、胃肠炎等。

目前，对沙门氏菌的检测主要是以传统的细菌分离、血清型实验和生化鉴定等方法为主，通常需要5-7天的检测周期，存在操作繁琐、灵敏度低和准确率不高等缺陷，不能满足及时有效的质量监测和疾病控制需求。同时，市面上也存在灵敏度更高的检测方法，如常规PCR检测技术，该方法也是诊断机体或食物中检测沙门氏菌最常用的方法，但是该方法特异性低、在复杂样品中对PCR扩增存在抑制作用，扩增时容易产生假阳性。另外，食物中的沙门氏菌浓度较低，往往容易导致产生漏检，但食物中的低浓度沙门氏菌也足以引起机体患病，因此，开发一种灵敏度高、检测周期短的检测方法迫在眉睫。因此急待开发精确、灵敏、快速、无污染的临床病原微生物检验方法。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种灵敏度高的基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组、同时提供该引物组的用途、利用该引物组制备的试剂盒及该使用试剂盒检测沙门氏菌的检测方法。

本发明所采用的技术方案为：

本发明提供了一种基于巢式PCR的检测沙门氏菌的引物组，所述引物组包括两对引物，其中外引物为F1和R1，内引物为F2和R2，所述F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还提供了一种检测沙门氏菌的试剂盒，包括前述的引物组、PCR扩增试剂、阳性质控品和阴性质控品，所述阳性质控品为沙门氏菌标准株基因组DNA，即肠炎沙门氏菌标准株ATCC13076，所述阴性质控品为双蒸水。

具体的，上述检测沙门氏菌的试剂盒，所述PCR扩增试剂为浓度为2×的PCR MIX。

本发明还提供了一种用前述试剂盒检测沙门氏菌的检测方法，包括以下步骤：