[发明专利]一种O型口蹄疫病毒样颗粒抗原、及其疫苗组合物、制备方法和应用

权利要求书

1.一种口蹄疫病毒样颗粒抗原，其中，所述口蹄疫病毒样颗粒抗原由VP0、VP1、VP3抗原蛋白组装而成，其中，所述VP0抗原蛋白如Seq ID No.1所示核苷酸序列编码，所述VP1抗原蛋白如Seq ID No.3所示核苷酸序列编码，VP3抗原蛋白如Seq ID No.2所示核苷酸序列编码。

2.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的权利要求1所述的口蹄疫病毒样颗粒抗原和药学上可以接受的载体。

3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述口蹄疫病毒样颗粒抗原含量为160-240μg/ml。

4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述口蹄疫病毒样颗粒抗原含量为200μg/ml。

5.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述药学上可以接受的载体包括佐剂，所述佐剂选自：（1）铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；（2）油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或（3）丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Block co-polymer、SAF-M、单磷酰脂质A、Avridine脂质-胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽、Gel佐剂中的一种或几种。

6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中，皂苷为Quil A、QS-21或GPI-0100。

7.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中，所述佐剂为ISA 206佐剂。

8.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中，所述佐剂的浓度范围为5%-60%V/V。

9.根据权利要求8所述的疫苗组合物，其中，所述佐剂的浓度范围为30%-60% V/V。

10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其中，所述佐剂的浓度为50％V/V。

11.一种制备权利要求2所述疫苗组合物的方法，其中，所述方法包括：

步骤（1）分别克隆、重组所述VP0抗原蛋白的基因、所述VP1抗原蛋白的基因和所述VP3抗原蛋白的基因到同一串联表达载体；

步骤（2）转化所述步骤（1）的重组表达载体到宿主，可溶性表达VP0抗原蛋白、VP1抗原蛋白和VP3抗原蛋白，表达的VP0抗原蛋白、VP1抗原蛋白和VP3抗原蛋白自我组装为病毒样颗粒抗原；

步骤（3）分离、纯化所述步骤（2）的病毒样颗粒抗原，加入佐剂，得到所述的疫苗组合物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述步骤（1）的串联表达载体为pET28a；所述步骤（2）的宿主为E.coli BL21（DE3）。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述步骤（2）中在宿主细胞扩增后，加入IPTG，诱导所述蛋白表达。

14.根据权利要求11所述的方法，其中，所述步骤（3）的分离、纯化工序为破碎菌体后，取上清，采用硫酸铵分级沉淀法和色谱纯化所述病毒样颗粒抗原。

15.权利要求2~10任一项所述的疫苗组合物在制备预防O型口蹄疫的药物中的应用。