[发明专利]一种核桃组织培养再生体系构建方法在审
| 申请号： | 201811447129.1 | 申请日： | 2018-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN109302988A | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 王小宇;王露 | 申请（专利权）人： | 广西玉林玖旺农业科技有限公司 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00;A01C1/08 |
| 代理公司： | 玉林市振盛专利商标代理事务所 45109 | 代理人： | 卢翔飞 |
| 地址： | 537024 广西壮族自治区玉林*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核桃 组织培养再生体系 构建 补血 愈伤组织诱导 步骤构建 分化培养 技术获得 生根培养 未成熟胚 无性快繁 遗传转化 优质种苗 中医应用 种子消毒 株性稳定 长寿果 外植体 益智果 坚果 炼苗 润肺 种苗 移栽 无毒 医学 | ||
1.一种核桃组织培养再生体系构建方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，种子消毒：选择未成熟果子，去叶后于洗衣粉水浸泡42min，刷净后自来水冲洗2h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒36s后用无菌水洗10次，再用0.1%升汞溶液消毒32min，用无菌水冲洗10次后备用；
步骤2，胚愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后未成熟种胚切成0.5cm×0.5cm×0.5cm接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养48天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3200lx，直至诱导形成胚性愈伤组织；诱导培养基为：ER+6-BA6mg/L+NAA1.5mg/L+GA37 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.2g/L，pH为5.8；
步骤3，分化培养：将步骤（2）培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养18天，然后置于每天光照16小时，光照强度为5600lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽；分化培养基为：ER+6-BA5.2mg/L+IBA1.5mg/L+蔗糖35g/L+琼脂7.2g/L，pH为5.8；
步骤4,生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为4.5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+IBA1.2mg/L+GGR2.2mg/L+KT3.2mg/L+蔗糖35g/L+琼脂7.2g/L，pH为5.8；
步骤5，炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约12cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗10天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和粘土混合成的基质中并定植于大田中。
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