[发明专利]一种mir338基因沉默的脐带间充质干细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种mir338基因沉默的脐带间充质干细胞及其制备方法和应用。所述制备方法包括以下步骤：S1.将目的基因插入慢病毒系统载体中，构建LentiCRISPR v2‑mir338重组质粒；S2.将S1所得LentiCRISPR v2‑mir338重组质粒与包装质粒共转染宿主细胞，制备得到慢病毒颗粒；S3.将S2所得慢病毒颗粒转染HUMSCs，即得到基因工程化的HUMSCs。HUMSCs经沉默mir338基因表达后，细胞增殖速度加快，将HUMSCs注射到脑损伤小型猪颅内，对脑损伤有较好的治疗效果。

技术领域

本发明涉及基因工程与生物医学工程技术领域，具体地，涉及一种mir338基因沉默的脐带间充质干细胞及其制备方法和应用。

背景技术

缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease，ICVD)是指局部脑组织包括神经细胞和胶质细胞及联系纤维由于供血障碍发生的病变、坏死或功能瞬态损耗。目前，缺血性脑血管疾病在全部脑血管病中約占80％，并且脑缺血疾病有着发生率高，死亡率高，复发率高，致残率高等特点。而我国是卒中高发的国家，每年新发脑卒中200万人，卒中死亡人数约250万人，年增长率达8.7％。临床上因大脑中动脉闭塞导致的缺血性脑血管病占绝大多数。目前，随着医疗水平和医疗服务条件的提高，特别是急救手段和治疗效果的提高，使得脑卒中患者的死亡率逐渐下降，而生存下来的脑卒中患者大约有75％的人遗留不同程序的致残，严重影响患者的日常生活活动能力和社交能力，给家庭和社会带来了巨大的负担，因此，研究脑缺血的治疗及康复，降低其死亡率和致残率，对提高患者的生活质量有着极大的意义。

干细胞是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能产生至少一种高度分化子代细胞的细胞，主要存在于胚胎、骨髓、外周血、脐带血等处，而血液(外周血、脐带血)中的干细胞，目前发现有造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)和间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)两种。脐带血中干细胞含量丰富，明显超过外周血含量。MSCs是混合细胞群，不具备典型的形态特征，其表达的表面标志抗原具有非单一性，它表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志，目前没有找到MSCs的特异性抗原标记，鉴定MSCs主要是根据其形态、功能等。许多研究证明MSCs均标记为：SH₂(+)、SH₃ (+)、CD₂₉(+)、CD₄₄(+)、CD₇₁(+)、CD₉₀(+)、CD₁₀₅(+)、CD₁₀₆(+)、CD_120a (+)、CD₁₂₄(+)、CD₁₆₆(+)。MSCs在体外可分化为神经样细胞。如在脑源性神经营养性因子、碱性成纤维生长因子的诱导或脑组织细胞共培养，MSCs能分化为具有神经元和神经胶质细胞标志的细胞。

脐带血间充质干细胞作为最有潜力的多潜能干细胞之一，其来源丰富、采集方便、安全、无伦理问题，且具有免疫调节作用等特点，决定了其在临床治疗方面具有很大的应用前景。目前干细胞的临床应用有两种方法：一是直接将脐带血间充质干细胞移植体内，通过体内的微环境诱导其为相应的细胞，发挥相应的作用；二是将脐带血间充质干细胞体外培养、定向诱导其分化为目的神经样细胞，然后通过一定的方法植入到体内，治疗相关神经系统疾病。脐带血间充质干细胞作为最有潜力的多潜能干细胞，具有多向分化潜能，在体外能够定向诱导分化为各种神经细胞，为神经系统疾病的治疗提供了新的思路。