[发明专利]黑色食物小分子肽在修复肝损伤中的医用用途

说明书

本发明提供了一种黑色食物小分子肽在修复肝损伤中的医用用途，由AtD‑SAT转基因酵母菌株发酵所得蛋氨酸；所述的黑色食物小分子肽对由肝纤维化、酒精肝引起的受损肝细胞具有良好的抗炎和修复作用；利用黑色食物小分子肽制成的药物具有临床效果显著，毒副作用小的特点；本发明黑色食物小分子肽制备方法简单实用。

技术领域

本发明提供一种黑色食物小分子肽及制备方法，同时进一步公开了该小分子肽在修复受损肝损伤中的医用用途，属于涉及药物技术领域。

背景技术

肝脏作为体内代谢过程中的关键器官，由体内代谢产生的各种有毒有害物质和外源性物质，长期接触可能会引起慢性肝损伤。肝病是危害人类健康的常见疾病之一，威胁着人们的生活和工作。目前对于肝病的防治也被全世界所关注，然而尚未阐明慢性肝损伤的发病机制。因此寻找药效持久、低毒、安全的保肝护肝药物是目前研究的重要方向。

花生中油酸的相对含量高达50%以上，油酸对人体心血管有益，对人体的高血脂、有害胆固醇有降低作用，而不影响或相对提高有益胆固醇。

目前，黑色食品的保健养生作用越来越受广大人们认可和喜爱，由于黑色食品包含黑芝麻、黑米、黑豆、黑枸杞、花生、黑木耳、黑桑葚等众多食物种类，并且各个具有不同功效和食用方法；本发明的任务是提供一种从黑色食品中提取的小分子肽，用于酒精肝、肝纤维化和代谢性疾病导致的肝损性的抗炎修复。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种黑色食物小分子肽，对酒精性肝损伤、肝纤维化和代谢性疾病导致的肝损有很好的抗炎修复功能。

本发明所述的一种AtD-SAT转基因酵母菌株，基因序列如SEQ No.1所示。

所述的一种AtD-SAT转基因酵母菌株的制备方法制备，包括以下步骤：

1） 总RNA 提取和反转录

以Total RNA 提取试剂RNAiso Plus 提取AtD-SAT酵母的总RNA，经1%的琼脂糖凝胶电泳检测其完整性后，利用核酸定量仪测定其浓度和纯度，取1 μ g 总RNA，以AOLP 为引物：5'- GGCCACGCGTCGACTAGTACT16 （G/A/C）- 3' 反转录合成cDNA；

2） 基因克隆、重组表达载体的构建及电转化

根据酵母转录组序列信息，设计特异引物DBTN F：AGCAATGGTG GAAGAGTAAA，以cDNA 为模板进行扩增；根据酵母AtD-SAT基因编码成熟肽序列设计引物，在引物5' 端分别引入酶切位点Eco RI 和Xba I；

上游引物P1 ：5'- CGGGAATTCATGTCGTGTGAAGAACTG - 3'；

下游引物P2 ：5'- CTAGTCTGAGGATCCCATCCCCATACTC - 3' ；

以酵母的cDNA 为模板，以引物P1 和P2 进行目的片段的PCR 扩增，回收目的片段后用Eco RI 和Xba I 进行双酶切；将双酶切后的目的片段连接至经Eco RI 和Xba I双酶切后的pPICZ-DSAT载体，将其转化大肠杆菌感受态Trans- T- 1 中，筛选阳性克隆；将表达载体pPICZ-DSAT用Sac I 线性化后电转化入毕赤酵母感受态中，平行设置pPICZ-DSAT载体为对照；电转化后将转化子涂布在MD 平板上，所含物质的质量浓度分别为无氨基酸酵母氮源基础培养基YNB 13.4 g/L、生物素0.4 mg/L、葡萄糖20 g/L、琼脂15 g/L，将平板置于30℃培养箱培养，直至出现单个菌落，此菌落即为目标酵母菌——AtD-SAT酵母菌株；

3） 遗传霉素筛选及PCR