[发明专利]一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法

权利要求书

1.一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法，其特征在于，所述的建立方法包括：

S1、试剂准备包括：IL2细胞因子、AlyS505NK-AC培养基、EX培养基、HMBPP抗原、CD3抗体、CD56抗体、γ9抗体和PBMC外周血单个核细胞；

S2、选用12孔板，将每毫升1.5×10⁶个PBMC外周血单个核细胞的细胞放置于孔板内；依次加入无血清AlyS505NK-AC培养基激活、IL2细胞因子和HMBPP抗原；培养观察3天；其中所述IL2细胞因子在培养基的浓度为10ng/mL、20ng/mL、40 ng/mL、60 ng/mL或80 ng/mL，同一孔板内首次加入的培养基与后续增补的培养基中，IL2细胞因子浓度维持一致；

S3、第3天，在12孔板中增补2mL无血清AlyS505NK-AC培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原，使得最终浓度与原始浓度相同，总体积为3mL，然后培养箱中培养4天；

S4、第7天后，对细胞进行500g速度离心，离心5min后弃上清，然后将12孔板中的细胞分别转至T25细胞培养瓶中，再然后，更换5mL EX培养基进行扩增培养：依次加入无血清EX培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原；

S5、第10天后，在T25细胞培养瓶中增补5mL无血清EX培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原，使得最终浓度与原始浓度一致，总体积为10mL；

S6、第12天后，继续增补10 mL无血清EX培养基、IL2细胞因子和HMBPP抗原，使得最终浓度与原始浓度一致，总体积为20mL；

S7、第14天后，检测NK及γδT细胞比例及细胞总数；所述CD3抗体、CD56抗体、γ9抗体用于检测中。

2.根据权利要求1所述的一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法，其特征在于，所述步骤S2中，不同IL2细胞因子浓度的培养基分别设置有至少两孔。

3.根据权利要求1所述的一种NK细胞和γδT细胞共培养的建立方法，其特征在于，所述的建立方法还包括检测方法与培养应用。