[发明专利]一种检测硝基还原酶的荧光探针及其制备方法与酶促反应的应用

权利要求书

1.一种检测硝基还原酶的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针为3-(4-(2-(4'-(二苯胺基)-3-((4-硝基苄基)氧基)-[1,1'-联苯基]-4-基)乙烯基)喹啉-1-溴)丙烷-1-磺酸盐，结构式如下：

2.制备权利要求1所述的一种检测硝基还原酶的荧光探针的方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

(1)将4'-(二苯基胺基)-3-羟基-[1,1'-联苯]-4-甲醛溶于二甲基亚砜中，将对硝基苄溴溶于四氢呋喃中，分别超声后混合在一起，并加入碳酸铯，控制反应温度为50-150℃，反应产物经分离纯化，得到黄色固体粉末4'-(二苯基胺基)-3-((4-硝基苄基)氧基)-[1,1'-联苯基]-4-甲醛；

(2)将3-(4-甲基喹啉-1-溴)丙烷-1-磺酸盐溶于吡啶中，再加入乙酸，充分混合后加入步骤(1)所得到的4'-(二苯基胺基)-3-((4-硝基苄基)氧基)-[1,1'-联苯基]-4-甲醛，搅拌加热至25-80℃反应，反应产物经分离纯化，得到紫红色固体粉末3-(4-(2-(4'-(二苯胺基)-3-((4-硝基苄基)氧基)-[1,1'-联苯基]-4-基)乙烯基)喹啉-1-溴)丙烷-1-磺酸盐。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的4'-(二苯基胺基)-3-羟基-[1,1'-联苯]-4-甲醛和对硝基苄溴用量的摩尔比为1:(1.5-2)。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述碳酸铯和对硝基苄溴用量的摩尔比为(4-5):1。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的3-(4-甲基喹啉-1-溴)丙烷-1-磺酸盐和4'-(二苯基胺基)-3-((4-硝基苄基)氧基)-[1,1'-联苯基]-4-甲醛用量的摩尔比为1:(1-2)。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述乙酸和3-(4-甲基喹啉-1-溴)丙烷-1-磺酸盐用量的摩尔比为(2-4):1。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述反应的时间为5h–48h。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述反应的时间为3h–24h。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述分离纯化步骤为：反应液冷却至室温，用二氯甲烷/去离子水萃取，收集有机相，干燥，过滤，旋转蒸发除去溶剂，所得固体经硅胶层析柱纯化；步骤(2)所述分离纯化步骤为：反应液冷却至室温，旋转蒸发仪除去溶剂，之后加入乙酸乙酯，并分别用盐酸和饱和食盐水洗涤，再干燥，过滤，旋转蒸发除去溶剂，所得固体经硅胶层析柱纯化。

10.权利要求1所述的一种检测硝基还原酶的荧光探针用于工业中芳香硝基转化为芳香胺基酶促反应中硝基还原酶的检测分析应用。