[发明专利]甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白、由其制备的多克隆抗体、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白，其特征在于：是由甘薯褪绿矮化病毒和甘薯羽状斑驳病毒CP基因的融合片段构建到重组表达载体，转化表达菌株，诱导表达得到。

2.根据权利要求1所述甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白，其特征在于：所述甘薯褪绿矮化病毒和甘薯羽状斑驳病毒CP基因的融合片段的核酸序列如SEQ ID No:1所示。

3.根据权利要求1或2所述甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白序列如SEQ ID No:2所示。

4.根据权利要求3所述甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白的制备方法，其特征在于：步骤如下：

(1)重组表达载体的构建：在甘薯褪绿矮化病毒和甘薯羽状斑驳病毒CP基因的融合片段两端分别加上NdeⅠ和HindⅢ的酶切接头，酶切后，连接到原核表达载体pET22b，得到重组表达载体；

(2)转化表达菌株：将重组表达载体转化Rosetta(DE3)感受态细胞；

(3)诱导表达：挑取(2)中阳性克隆，诱导表达融合蛋白；

(4)融合蛋白纯化：采用镍离子亲和层析纯化融合蛋白。

5.根据权利要求4所述甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述诱导表达条件为：IPTG添加终浓度为0.5mM，诱导温度20℃，转速220rpm，诱导过夜。

6.权利要求4或5所述方法制备的甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白的应用。

7.一种甘薯SPVD病毒重组双CP多克隆抗体的制备方法，其特征在于：采用权利要求4或5所述方法制备的甘薯SPVD病毒重组双CP融合蛋白免疫兔，获得的抗血清即为甘薯SPVD病毒重组双CP多克隆抗体。

8.权利要求7方法制备的甘薯SPVD病毒重组双CP多克隆抗体。

9.权利要求8所述多克隆抗体在制备检测甘薯SPVD病毒的试剂中的应用。

10.一种检测甘薯SPVD病毒方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取待测甘薯叶，用液氮研磨破碎后，按10mL/g加入病毒提取缓冲液并进一步研磨，4℃、12000r离心5min后取上清液；

(2)每反应孔加150μL(1)中的上清液，4℃包被过夜后洗涤；加200μL 3％的BSA进行封闭；

(3)每孔加150μL稀释的权利要求7的多克隆抗体、150μL的酶标二抗稀释液及150μL的底物液，最后加100μL的1.5M NaOH终止反应；用酶标仪在450nm波长下测定OD值。