[发明专利]从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法

权利要求书

1.一种从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:

A.将滇山茶茶饼用乙醇水溶液进行超声浸提，得到提取液；将所述提取液减压蒸馏至无醇得到浓缩液；

B.将所述浓缩液加入大孔树脂层析柱，依次用水、20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标提取物的洗脱液得粗流份段；

C.将所述粗流份段加入RP-C18填料层析柱，用乙腈-甲酸水溶液体系进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标提取物的洗脱液得准流份段；减压浓缩、干燥得到粗分离物；

D.使用第一C18色谱柱、用甲醇-甲酸水溶液体系作为流动相，将所述粗分离物用第一溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有目标化合物的流份段，浓缩冻干得到预分离物；

E.使用第二C18色谱柱、用乙腈-甲酸水溶液作为流动相，将所述预分离物用第二溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有目标化合物的流份段，浓缩冻干得到目标化合物，所述目标化合物的结构式为：

所述大孔树脂层析柱中的大孔树脂的型号为D101，所述大孔树脂的粒径为60-16目、比表面积≥550m²/g、比照吸附量以酚/干基计≥20mg/g。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂使用前需用乙醇洗脱至颜色清亮，再用纯水洗脱至无醇味。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B中，所述大孔树脂层析柱的柱体积为2L；每500mL收集一次洗脱液并顺次标号，所述粗流份段由第A26-28号洗脱液合并得到。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RP-C18填料层析柱的制备方法为：取RP-C18填料加入乙醇溶液进行超声，去除多余气泡后装入层析柱中。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤C中，所述乙腈-甲酸水溶液体系为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.1％的甲酸水溶液；洗脱梯度配比为：流动相A与流动相B的体积比依次为17：83、30：70、40：60、100：0，每个洗脱梯度洗脱至无色为止。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤C中，所述RP-C18填料层析柱的柱体积为1.2L；每200mL收集一次洗脱液并顺次标号，所述准流份段由第B22-25号洗脱液合并得到。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤D中，所述第一C18色谱柱的规格为：Venusil MP C18，尺寸10mm×250mm，填料粒径为5微米；所述甲醇-甲酸水溶液体系为：流动相C为甲醇，流动相D为体积分数0.1％的甲酸水溶液；其洗脱配比为：所述流动相C与所述流动相D的体积比为50：50。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤E中，所述第二C18色谱柱的规格为：Venusil MP C18，尺寸10mm×250mm，填料粒径为5微米；所述乙腈-甲酸水溶液体系为：流动相E为乙腈，流动相F为体积分数0.1％的甲酸水溶液，其洗脱配比为：所述流动相E与所述流动相F的体积比为23：77。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一溶剂为体积比为17：83的乙腈-体积分数0.1％的甲酸水溶液，所述第二溶剂为体积比为50：50的甲醇-体积分数0.1％的甲酸水溶液。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述滇山茶茶饼的制作方法为：将滇山茶茶果晾干、去壳，以冷榨法脱去油脂后晾干，粉碎即可；所述乙醇水溶液的体积分数为50-60％；所述浸提的方法为：料液比为1kg所述滇山茶茶饼对应3-4L所述乙醇水溶液，在30-40℃条件下超声浸提2-4次，过滤得到所述提取液。