[发明专利]从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法

说明书

本发明提供了一种从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法。所述方法为:将滇山茶茶饼浸提得提取液，减压蒸馏得到浓缩液；加入大孔树脂层析柱，用水、20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，收集洗脱液得粗流份段；将粗流份段加入RP‑C18填料层析柱，用乙腈‑甲酸水溶液体系进行梯度洗脱，减压浓缩、干燥得到粗分离物；使用C18色谱柱、甲醇‑甲酸水溶液体系作为流动相，将粗分离物用溶剂溶解后进样进行梯度洗脱，浓缩冻干得预分离物；使用C18色谱柱、用乙腈‑甲酸水溶液作为流动相，预分离物用溶剂溶解后进样进行等度洗脱，浓缩冻干得到目标化合物。本申请提供的方法，首次从山茶属植物中分离出目标化合物，提取纯度高。

技术领域

本发明涉及化合物提取领域，具体而言，涉及一种从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法。

背景技术

滇山茶(Camellia reticulata Lindl.)又名滇茶或腾冲红花油茶，山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia L.)多年生常绿乔木，是中国特有物种、国家二级重点保护植物。我国作为油茶的原产地，已有2300多年的栽培历史，云南省是我国的油茶大省，具有丰富的油茶资源。

油茶多用来榨油，一般来说，油茶籽中油酸、亚油酸等脂肪酸的含量是评定油茶品质的重要指标。滇山茶与普通的油茶相比，含油量高、油体透亮，不饱和脂肪酸含量高达83.5％。滇山茶含有丰富的生物活性物质，如黄酮、有机酸、皂苷、三萜类化合物等，这些化合物有一定的营养保健功效，能降低胆固醇、预防肿瘤、增强机体免疫力，具有很好的生物利用价值。

山奈酚及其衍生物是油茶中一类重要的化合物，具有抗癌、治疗糖尿病和骨质疏松以及保护损伤细胞等功能。

现有技术对于滇山茶中所含有的活性物质分析不全面，很多有效成分有待分离提取。将滇山茶中的有效活性物质从复杂多样的成分中分离提取出来，得到纯度较高的产品，对于滇山茶的深度应用具有重要的作用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法，所述方法首次从滇山茶中提取出目标化合物，而且快速有效、纯度很高。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种从滇山茶中提取黄酮类化合物的方法，所述方法包括以下步骤:

A.将滇山茶茶饼用乙醇水溶液进行超声浸提，得到提取液；将所述提取液减压蒸馏至无醇得到浓缩液；

B.将所述浓缩液加入大孔树脂层析柱，依次用水、20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标提取物的洗脱液得粗流份段；

C.将所述粗流份段加入RP-C18填料层析柱，用乙腈-甲酸水溶液体系进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标提取物的洗脱液得准流份段；减压浓缩、干燥得到粗分离物；

D.使用第一C18色谱柱、用甲醇-甲酸水溶液体系作为流动相，将所述粗分离物用第一溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有目标化合物的流份段，浓缩冻干得到预分离物；

E.使用第二C18色谱柱、用乙腈-甲酸水溶液作为流动相，将所述预分离物用第二溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有目标化合物的流份段，浓缩冻干得到目标化合物，所述目标化合物的结构式为：

通过浸提-浓缩-大孔树脂柱层析-RP-C18柱层析-C18色谱柱高效液相色谱制备-C18色谱柱高效液相色谱再次制备的方法，可以有效的将目标化合物从滇山茶众多的成分中分离提取出来，提取得率大于 14.6mg/kg，纯度高于97.2％。