[发明专利]一种小麦粉及其制品中间苯二酚的高效液相色谱测定方法

说明书

本发明公开了一种小麦粉及其制品中间苯二酚的高效液相色谱测定方法，采用以下步骤：（1）前处理：称取小麦粉或其制品样品，加入甲醇涡旋混匀，超声，加入亚铁氰化钾和乙酸锌，用甲醇定容至刻度，离心，取上清液过有机相滤膜，待上机；（2）标准溶液的配制；（3）获得液相色谱图、回归方程；（4）样品分析：用高效液相色谱仪配二极管阵列检测器串联荧光检测器对样品进行分析检测。该方法采用紫外检测器和荧光检测器串联检测，有效避免了单一检测器定性手段单一的问题，增强了定性定量可靠性。方法操作简单、灵敏度高、选择性好、检出限低，非常适用于小麦粉及其制品中痕量间苯二酚的定性、定量检测。

技术领域

本发明属于涉及一种小麦粉及其制品中间苯二酚的高效液相色谱测定方法，属于食品检测技术领域。

背景技术

间苯二酚（英文名Resorcinol）是一种重要的化工原料，也是实验室中一种常用试剂，已被证实为内分泌干扰物，长期接触，可导致皮炎、黏膜炎、惊厥和发绀等健康危害。因此，在医药和化妆品产品中有着严格的使用限量。在食品领域，我国国家标准GB2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》把其列为允许使用的食品用合成香料，在各类食品中按生产需要适量使用。但依据原食药总局关于进一步加强小麦粉质量安全监管的公告（2017年第132号），小麦粉中禁止添加过氧化苯甲酰、次磷酸钠、硫脲、间苯二酚等非食品原料。因此，加强小麦粉中间苯二酚的使用监管尤为重要。目前，小麦粉及其制品中间苯二酚的检测尚无方法标准，也无文献报道，不仅导致小麦粉及其制品生产企业在原料进货查验、出厂检验等环节缺少可靠的检验方法，还严重影响食品药品监管部门对小麦粉及其制品生产企业的日常监督检查与风险监测。综上，研究建立小麦粉及其制品中间苯二酚的检测方法意义重大。

目前， 已报道的测定间苯二酚的方法有分光光度法、电化学法、同步荧光法、气相色谱法、离子色谱法和液相色谱法等。

发明内容

本研究建立一种小麦粉及其制品中间苯二酚含量的高效液相色谱测定方法，方法采用紫外检测器和荧光检测器串联检测，有效避免了单一检测器定性手段单一的问题，增强了定性定量可靠性。方法操作简单、灵敏度高、选择性好、检出限低，非常适用于小麦粉及其制品中痕量间苯二酚的定性、定量检测。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种小麦粉及其制品中间苯二酚的高效液相色谱测定方法，采用以下步骤：

（1）前处理：称取小麦粉或其制品样品，加入甲醇涡旋混匀，超声，加入亚铁氰化钾和乙酸锌，用甲醇定容至刻度，离心，取上清液过有机相滤膜，待上机；

（2）标准溶液的配制：准确称取10mg间苯二酚标准品于10mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度，得到浓度为1mg/mL的标准储备液，工作标准溶液用甲醇逐级稀释；

（3）获得液相色谱图、回归方程：取步骤（2）中的系列标准工作溶液上机测定，得到标准溶液色谱图，以标准溶液峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，绘制标准曲线，得到线性回归方程；

（4）样品分析：用高效液相色谱仪配二极管阵列检测器和串联荧光检测器对样品进行分析检测。

本发明所述的测定方法，前处理的步骤为：称取5g样品于25mL比色管中，加入15mL甲醇涡旋混匀，超声15min, 加入1mL 92 g/L亚铁氰化钾和1mL 183 g/L乙酸锌，用甲醇定容至刻度，摇匀，于7000r/min离心3min，取上清液过0.22μm有机相滤膜，待上机。

本发明所述的测定方法，高效液相色谱仪的流动相为：甲醇/水、乙腈/水、甲醇/20mmol/L醋酸铵或乙腈/20mmol/L醋酸铵。

本发明所述的测定方法，高效液相色谱仪型号：Waters 2695或Thermo Ultimate；色谱柱：C18-Amide柱长150mm，柱内径4.6mm，填料内径3μm，流动相：A为水，B为甲醇。