[发明专利]一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物及其制备方法和应用

说明书

本发明属于海洋放线菌资源开发与利用领域，具体涉及一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物及其应用。所述提取复合物从海洋放线菌F8的液体发酵产物中提取；所述提取方法，采用以下步骤：将菌株接种到种子液培养基中；将发酵液真空旋转蒸发浓缩至发酵液体积的1/10，用氯仿反复萃取浓缩液去掉氯仿层留下水层，将水层进行层析，收集100%甲醇洗脱液，得粗品；将粗品溶解到超纯水中进行葡聚糖凝胶G‑25层析，在316min时出现单峰并对此峰进行收集，将收集液冷冻干燥得到复合物。该复合物具有很好的抑制金黄色葡萄球菌的生长，具有很好的药用潜力。

技术领域

一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物及其制备方法和应用。

背景技术

本发明属于海洋放线菌资源开发与利用领域，具体涉及一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物及其应用。

发明内容

本专利提供了从一株海洋放线菌F8（streptomyces griseorubens）中分离提取一种复合物，该复合物能够很好的抑制金黄色葡萄球菌的生长，具有很好的药用潜力。

为实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案。

一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物，所述提取复合物从海洋放线菌F8的液体发酵产物中提取；所述海洋放线菌为灰略红链霉菌（streptomyces griseorubens）F8，于2017年11月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：CGMCC No.14923。

优选地，所述海洋放线菌发酵所用培养基和种子液培养基的pH 均为7.5-8，121℃灭菌20min；均由以下组分组成：KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl 0.5，自然海水1L。

一种上述提取复合物的提取方法，采用以下步骤：

（1）发酵液的制备

将菌株接种到种子液培养基中，于25-30℃、180-250r/min条件下摇瓶培养2-3d，获得种子液；将种子液以8%的接种量接种到培养基中，在25-30℃、180-250r/min条件下培养8-11d获得发酵液。

（2）粗提物的获得

将步骤（1）制备的发酵液真空旋转蒸发浓缩至发酵液体积的1/10，用等体积的氯仿反复萃取浓缩液去掉氯仿层留下水层，将水层进行层析，然后进行梯度洗脱，收集100%甲醇洗脱液，真空旋转蒸发至干，得粗品；

（3）复合物的制备

将步骤（2）制备的粗品溶解到超纯水中进行葡聚糖凝胶G-25层析，在316min时出现单峰并对此峰进行收集，将收集液冷冻干燥得到复合物。

优选地，步骤（2）所述的层析为：先将水层进行732阳离子交换树脂层析，再进行AB-8大孔树脂层析。

优选地，所述层析的具体操作为称取200g的732阳离子交换树脂放到层析柱中，先用2L的超纯水平衡层析柱，然后将水层缓慢地加入到层析柱中，调节流速5-10滴/s收集流出液；将收集的流出液进行AB-8大孔树脂层析：称取100g AB-8树脂于层析柱中，用2L超纯水平衡层析柱，然后将样品缓慢地加入到层析柱中。

优选地，所述梯度洗脱具体的操作为用超纯水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇进行梯度洗脱。

优选地，所述葡聚糖凝胶G-25层析，所用到的仪器为HP PLUS 10D蛋白纯化仪，所述蛋白仪具体操作参数为：

（1）平衡：平衡2个柱体积，流速设置为5mL/min（2）进样：进样2mL，流速设置为0.5mL/min；

（3）洗脱：洗脱3个柱体积，流速设置为0.5mL/min；