[发明专利]猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法在审
| 申请号： | 201811465138.3 | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109628374A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 吴月燕;吴燕燕;章辰飞;俞超 | 申请（专利权）人： | 浙江万里学院 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙) 33228 | 代理人： | 周民乐 |
| 地址： | 315100*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 愈伤组织 原生质体 预处理 酶解 原生质体制 甘露醇 猕猴桃 光照 基础培养基 沉淀洗涤 培养条件 培养基 混合液 酶解液 上清液 渗透剂 蔗糖 放入 琼脂 重悬 沉淀 过滤 分裂 配合 | ||
1.猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)培养愈伤组织，培养基为以MS为基础培养基，添加0.5-1.5mg/L 6-BA，0.05-0.5mg/L NAA，25-35g/L蔗糖和5-9g/L琼脂，并调节pH为5.7-5.8，培养温度为23-26℃，光照强度为1000-1500lx，光照时间为16h/d；
(2)对步骤(1)所得的愈伤组织用0.3-0.7mol·L-1甘露醇进行预处理，预处理时间为0＜t≤90min；
(3)将步骤(2)所得的愈伤组织放入酶解液进行酶解；
(4)将酶解所得的混合液过滤，收集滤液并离心；取沉淀重悬，再次离心并弃去上清液，对沉淀洗涤即得原生质体。
2.如权利要求1所述的猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，添加物质浓度为0.5mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖和7g/L琼脂。
3.如权利要求1所述的猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，预处理条件为甘露醇浓度0.7M，处理时间60min。
4.如权利要求1所述的猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，酶解液的组成为甘露醇0.3-0.7mol·L-1，以质量浓度计，纤维素酶0.5-2.5％，果胶酶0.1-0.5％，离析酶0.25-1.25％。
5.如权利要求1所述的猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，酶解液的组成为甘露醇0.7mol·L-1，以质量浓度计，纤维素酶1.0％，果胶酶0.1％，离析酶1.25％。
6.如权利要求1所述的猕猴桃愈伤组织原生质体制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，沉淀重悬和沉淀洗涤用溶液均为含质量/体积为13％甘露醇的CPW溶液。
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