[发明专利]一种高产L-赖氨酸的重组谷氨酸棒状杆菌及其构建方法有效
| 申请号： | 201811465343.X | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109370974B | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈泰驰;李江华;堵国成;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/53;C12N15/77;C12P13/08;C12R1/15 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 赖氨酸 重组 谷氨酸 杆菌 及其 构建 方法 | ||
1.一种产L-赖氨酸的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，以谷氨酸棒杆菌CICC 23604为出发菌株，引入了外源的磷酸甘油醛脱氢酶编码基因
2.如权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，在NCgl1144基因的启动子下游引入了磷酸甘油醛脱氢酶编码基因
3.一种重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征在于，所述重组谷氨酸棒杆菌为：以谷氨酸棒杆菌CICC 23604为出发菌株，引入了外源的磷酸甘油醛脱氢酶编码基因
（1）构建磷酸甘油醛脱氢酶重组片段以及高丝氨酸激酶敲除片段：合成外源的磷酸甘油醛脱氢酶编码基因
（2）构建重组质粒：分别将GA1和TH2与含有sgRNA的线性化载体连接，分别得到含GA1的重组质粒和含TH2的重组质粒；所述线性化载体核苷酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示；
（3）构建产L-赖氨酸重组谷氨酸棒杆菌：将含cas9蛋白的质粒转化谷氨酸棒杆菌CICC23604，得到重组谷氨酸棒杆菌CGC9；随后将含GA1的重组质粒转化谷氨酸棒杆菌CGC9，得到重组谷氨酸棒杆菌CGC9-EGA，将含TH2的重组质粒转化谷氨酸棒杆菌CGC9-EGA，得到重组谷氨酸棒杆菌CGC9-EGT，去除外源质粒，得到重组谷氨酸棒杆菌CGGA0T。
4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述含cas9蛋白的质粒包括pFSC质粒。
5.权利要求1或2所述的重组谷氨酸棒杆菌在生产L-赖氨酸中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用包括将重组谷氨酸棒杆菌在30-34℃下培养22-26 h后，接种至发酵培养基，于30-34 ℃、180-200 rpm条件下培养58-72 h。
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