[发明专利]一种杜拉鲁肽ELISA检测方法

说明书

本发明涉及一种检测血样中杜拉鲁肽浓度的方法，具体而言，是涉及一种快速测定杜拉鲁肽血药浓度的酶联免疫反应(ELISA)试验方法，方法可以用mouse anti‑human GLP‑1捕获性抗体捕获杜拉鲁肽，然后加入带有HRP的抗人FC端二抗，加入TMB显色进行检测。该方法缩短检测时间，同时提高检测的灵敏度。

技术领域

本发明涉及一种测血样中杜拉鲁肽浓度的方法，具体而言，是一种快速测定杜拉鲁肽血药浓度的酶联免疫反应(ELISA)试验方法。

背景技术

糖尿病是一种慢性代谢性疾病，主要表现为高血糖，持续的高血糖是导致糖尿病并发症的主要因素，如视网膜、肾脏、神经系统及微血管并发症等。全球约有3.82亿糖尿病患者，预计2035年患者将达到6亿。糖尿病可分为胰岛素依赖型(1型糖尿病)和非胰岛素依赖型(2型糖尿病)。2型糖尿病患者约占总数的90％，对胰岛B细胞具有保护作用的新型药品成为这一领域的研究热点。患者体内细胞膜受体胰高血糖素样肽-1(Glucagon-likepeptide-1，GLP-1)的水平太低致胰岛B细胞受损，是2型糖尿病的重要致病因素。

GLP-1是一种肠促胰岛素，主要由分布于空肠、回肠和盲肠的L细胞分泌，并由胰高血糖素原基因转录、翻译及加工而成。GLP-1由30或31个氨基酸残基组成，有GLP-1(7-36)和GLP-1(7-37)两种亚型，对天然GLP-1结构改造后可获得长效的GLP-1R激动药。近年来，美国FDA已批准包括杜拉鲁肽(Dulaglutide)等一系列GLP-1R激动药上市。

杜拉鲁肽(商品名：)是由美国Lily公司研发的新型长效GLP-1R激动药，由两个具有DPP-4抑制作用的GLP-1类似物和人免疫球蛋白重链IgG4-Fc片段融合得到，其活性与内源性GLP-1相似，半衰期为5d，能有效延缓肾脏的清除作用。FDA于2014年9月批准杜拉鲁肽皮下注射液上市，主要适用于在饮食和体育锻炼基础上改善成人2型糖尿病患者的血糖控制水平。欧盟委员会于2014年12月批准杜拉鲁肽皮下注射液在欧洲上市。

杜拉鲁肽属于融合蛋白，将两个具有二肽基肽酶抑制作用的GLP-1(7-37)C端与人免疫球蛋白IgG4-Fc可结晶蛋白片段N端通过小肽分子链连接，并进行特定的氨基酸位点修饰，包括将GLP-1(7-37)的第36位精氨酸(Arg36)以及IgG4-Fc片段重链的第234位苯丙氨酸(Phe234)、第235位亮氨酸(Leu235)、第228位丝氨酸(Ser228)分别替换成甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、Ala、脯氨酸(Pro)，并去掉IgG4-Fc碳端的赖氨酸(Lys)。氨基酸位点的修饰降低了lgG4-Fc与其受体的结合作用，减少了细胞毒性，提高了药物安全性。杜拉鲁肽通过与细胞膜表面的GLP-1R结合激活胞内相关信号转导通路，以葡萄糖依赖方式促进胰岛素合成及分泌，并减少胰高血糖素分泌，从而降低血糖。杜拉鲁肽能延缓胃排空，可能降低口服治疗药物的吸收率，联合治疗指数较窄的口服糖尿病药物时，需要给予足够密切的监测。