[发明专利]一种病原微生物快速检测方法

权利要求书

1.一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、在Au@超薄Pt纳米材料表面修饰上待测病原微生物抗体，所得产物记为检测探针；

S2、筛选获得磁学性能优良、同时具有一定模拟酶活性的羧基化磁珠，在所述羧基化磁珠表面，通过EDC活化偶联的方式修饰上S1所述的待测病原微生物抗体，所得产物记为捕获探针；

S3、将S2所述捕获探针与一系列已知浓度的病原微生物样品孵育，磁分离洗涤，重悬，再加入S1所述检测探针孵育，磁分离洗涤后将获得的夹心产物重悬处理；

S4、将S3所得产物在酸性条件下与TMB、H₂O₂混合，构成催化反应体系，反应1-2min，取部分混合液滴至锡箔纸上进行拉曼测试，以病原微生物浓度的对数为横坐标，以对应的1608cm^-1处拉曼峰的强度变化值为纵坐标，绘制定量分析标准工作曲线；

S5、将待测未知浓度病原微生物样品依次与捕获探针和检测探针孵育后，所得产物在酸性条件下与TMB、H₂O₂混合，检测混合液在1608cm^-1处拉曼峰的强度变化值，根据定量分析标准工作曲线计算出样品中待测病原微生物的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，S1所述检测探针的制备方法为：将Au@超薄Pt纳米材料加入PB溶液中，然后再加入病原微生物抗体，混匀后，室温静置或温和振荡30-60min；然后再加入聚乙二醇溶液，混匀；室温静置20-30min后，离心处理，重悬。

3.根据权利要求1或2所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，所述Au@超薄Pt纳米材料同时具有拉曼活性和模拟酶催化活性，呈规则球形，粒径为30-80nm。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，所述Au@超薄Pt纳米材料的制备方法为：采用晶种增长法合成纳米金，然后通过蠕动泵缓慢加样的方式，在其表面包裹上铂层。

5.根据权利要求1所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，S2所述捕获探针的制备方法为：在羧基化磁珠中加入EDC溶液，快速振荡10-30min，继续加入病原微生物抗体，快速振荡2-4h，然后加入BSA溶液，快速振荡30-60min，离心洗涤，将获得的捕获探针重悬，冰箱4℃保存备用。

6.根据权利要求1或5所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，所述羧基化磁珠粒径为100-400nm。

7.根据权利要求1、2或5所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于：所述病原微生物为沙门氏菌。

8.根据权利要求1、2或5所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于：所述重悬溶液和洗涤溶液均为0.01M PB。

9.根据权利要求1所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，S4所述催化反应体系为10μL BR、20μL夹心产物、4.0μL 5mM TMB、1.0μL 2M H₂O₂，所述BR的pH为4.0-5.0。

10.根据权利要求1所述的一种病原微生物快速检测的方法，其特征在于，所述拉曼测试的条件为：激光波长为785nm，曝光时间为20s，平均测量3-5次。