[发明专利]一种病原微生物快速检测方法

说明书

本发明提供了一种病原微生物快速检测方法，包括如下的步骤：在双功能化Au@超薄Pt纳米材料表面修饰上待测病原微生物抗体，获得检测探针；在羧基化磁珠表面偶联修饰上所述待测病原微生物抗体，获得捕获探针；将待测样品依次与捕获探针和检测探针孵育后，获得类似三明治的夹心产物，所得产物在酸性条件下与TMB、H₂O₂混合，检测混合液在1608cm^‑1处拉曼峰的强度变化值，根据定量分析标准工作曲线计算出待测样品浓度。本方法的构建过程和检测过程快速简单，且采用Au@超薄Pt纳米材料和羧基化磁珠对TMB进行协同催化，不仅成本大大降低、而且灵敏度大大提高，适合病原微生物在基层和现场的快速、高灵敏检测。

技术领域

本发明涉及一种病原微生物快速检测方法，具体涉及一种基于双功能Au@超薄Pt纳米材料和免疫磁珠的病原微生物快速、无标记拉曼检测方法。

背景技术

背景技术

食品安全是公共卫生的重要事项，其中的食源性疾病更是一个严重的全球化问题。它不仅严重影响人们的生命健康、而且影响全球经济的发展。据美国疾病控制与预防中心(CDC)估计每年约有六分之一的美国人因食用被污染的食物或水源而患病，且其中有3000人因此而死亡，至此造成的经济损失高达156亿元。病原微生物作为引发食源性疾病的重要因素，已经引起社会各界的广泛重视，主要包括金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、单增李斯特菌等。其中，沙门氏菌是世界上最常见的食物中毒原因之一。全球每年有超过1亿人感染沙门氏菌，其中大多数人会在短期内自行恢复，但也有大约15.5万人会死亡。该微生物导致的疾病轻则上吐下泻肠胃炎，重则败血症、伤寒。我国的细菌性食物中毒有70％-80％也是沙门氏菌引起，其中抵抗力低下的人群，老年、婴幼儿尤其容易中招。

传统沙门氏菌等病原微生物的检测方法为琼脂培养法，其主要是依据病原微生物的形态特征和生理性状，进行分离、培养及一系列生化反应，整个过程通常需要两到三天，需要专业的操作人员且程序繁琐。这对货架寿命较短的食品在产品卫生状况方面的评估作用不大，难以满足食品生产厂家特别是出口厂家的检测期较短的需求。近年来，不断发展的PCR技术、酶联免疫技术、放射免疫技术等方法已逐步应用于沙门氏菌等病原微生物的快速检测。尽管这些方法可以提供灵敏的微生物定性、定量数据，然而它们当中有些耗时太长、操作复杂；有些仪器昂贵、需要专业的操作人员，且存在一定的假阳性；有些灵敏度不够高，均难以满足当前病原微生物现场快速检测的迫切需求。因此，发展一种简单、快速、廉价、高灵敏的病原微生物检测方法，对有效预防和控制食源性疾病的暴发，减轻病原微生物对人类造成的危害意义重大。

发明内容

针对现有检测技术中存在的问题，本发明提供了一种病原微生物快速检测方法，该方法基于双功能Au@超薄Pt纳米材料和免疫磁珠对病原微生物含量进行快速、无标记拉曼检测，其传感器构建过程和检测过程均不需要大型仪器，操作简单、快速，灵敏度高。

本发明的目的是通过以下的技术方案实现的：

一种病原微生物快速检测的方法，具体包括如下步骤：

S1、在Au@超薄Pt纳米材料表面通过静电吸附作用修饰上待测病原微生物抗体,所得产物记为无标记SERS检测探针；

S2、筛选获得磁学性能优良、同时具有一定模拟酶活性的羧基化磁珠，在所述羧基化磁珠表面，通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化偶联的方式修饰上S2中所述的待测病原微生物抗体，所得产物记为免疫磁珠捕获探针；

S3、将S2所述捕获探针与一系列已知浓度的病原微生物样品于室温(25-37℃)下孵育30min，磁分离洗涤，重悬，再加入S2所述检测探针于室温下孵育30min，磁分离洗涤，将获得的夹心结构产物重悬处理；