[发明专利]一种筛选标记自我删除的基因打靶载体及方法

权利要求书

1.一种筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，其包括如下元件：重组位点1、生殖特异性启动子、重组酶基因、筛选标记启动子、筛选标记基因和重组位点2；

其中，生殖特异性启动子选自Prm1基因启动子、Ddx4基因启动子、Stra8基因启动子、AMHR基因启动子或Zp3基因启动子。

2.根据权利要求1所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，筛选标记启动子选自PGK启动子、EM7启动子、或二者的组合；

优选的，筛选标记启动子为PGK启动子和EM7启动子的组合。

3.根据权利要求1或2所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，所述筛选标记基因为正筛选标记基因；

优选的，所述正筛选标记基因选自新霉素磷酸转移酶基因(neo)、潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)、黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸转移酶基因(gpt)、次黄嘌呤磷酸转移酶基因(Hprt)、胸腺嘧啶激酶基因(tk)及嘌呤霉素乙酰转移酶基因(puro)。

4.根据权利要求1或2所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，所述重组酶选自iCre重组酶、FLPo重组酶和Dre重组酶；

其中，当所述重组酶为iCre重组酶，重组位点1和重组位点2均为loxP位点；

当所述重组酶为FLPo重组酶，重组位点1和重组位点2均为FRT位点；

当所述重组酶为Dre重组酶，重组位点1和重组位点2均为rox位点。

5.根据权利要求4所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，重组位点1和重组位点2方向相同。

6.根据权利要求5所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，所述基因打靶载体在所述重组位点2下游还包括有不被所述重组酶识别的重组位点3，所述重组位点3选自loxP位点、FRT位点和rox位点。

7.根据权利要求1或2所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体，其特征在于，所述基因打靶载体的结构为线性结构或环形结构。

8.一种构建基因修饰动物模型的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

将权利要求1-7任一项所述的筛选标记自我删除的基因打靶载体导入动物胚胎干细胞；

将经鉴定正确的胚胎干细胞注射到囊胚后，移植到假孕的雌性动物子宫内，获得嵌合体；

将嵌合体与野生型动物交配，得到筛选标记删除的F1代动物模型。

9.根据权利要求8所述的构建基因修饰动物模型的方法，其特征在于，所述动物为非人哺乳动物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述非人哺乳动物选自小鼠、大鼠、马、牛、羊、猪、猴和猿。