[发明专利]一种转录组建库的方法、试剂和应用

权利要求书

1.一种转录组建库的方法，其特征在于：包括采用带U碱基的引物对cDNA进行PCR扩增，然后对扩增产物进行酶切将U碱基消化去除，制备具有黏性末端的PCR扩增产物，利用所制备的黏性末端，与含有互补黏性末端的接头互补连接，即获得转录组文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶切将U碱基消化去除，采用的酶包括Uracil-DNA Glycosylase和Endonuclease VIII。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：酶切将U碱基消化去除的步骤和与含有互补黏性末端的接头互补连接的步骤采用一步法完成，所述一步法包括将酶切消化去除U碱基的试剂、接头互补连接的试剂、接头和cDNA的PCR扩增产物加入到一个反应体系中一步反应完成酶切和加接头；

优选的，所述方法还包括，在加接头的同一反应容器中，对加接头的产物依序进行外切酶消化和文库纯化，获得可以直接用于测序的转录组文库。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述带U碱基的引物为Seq IDNo.1所示序列，

Seq ID No.1:5’-AAGCAGUGGUAUCAACGCAGAGTAC-3’。

5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述接头为Seq ID No.2所示序列，

Seq ID No.2:

5’-ACGTCAATCTCTCTCTTTTCCTCCTCCTCCGTTGTTGTTGTTGAGAGAGATTGACGTAAGCAGTGGTAT-3’。

6.一种用于转录组建库的试剂，其特征在于：包括带U碱基的引物，将U碱基消化去除的酶，黏性末端接头，以及连接酶。

7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于：所述将U碱基消化去除的酶包括Uracil-DNA Glycosylase和Endonuclease VIII，所述连接酶为Taq DNA ligase或T4 DNA ligase；

优选的，所述带U碱基的引物为Seq ID No.1所示序列，所述接头为Seq ID No.2所示序列。

8.根据权利要求6或7所述的试剂，其特征在于：还包括PCR扩增反应试剂、U碱基酶切消化试剂和连接酶反应缓冲液中的至少一种。

9.根据权利要求1-5任一项所述的方法或权利要求6-8任一项所述的试剂在全长转录组测序中的应用。

10.一种采用权利要求1-5任一项所述的方法或权利要求6-8任一项所述的试剂进行转录组建库的全长转录组测序方法。