[发明专利]一种快速检测水产病害金标核酸试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测水产病害金标核酸试纸条，其特征在于，包括样品垫、紧密连接于所述样品垫的含有探针Probe1-AuNPs复合物的金标垫、与所述金标垫紧密连接的硝酸纤维素膜和紧密连接于所述硝酸纤维素膜另一端的吸水垫；

所述硝酸纤维素膜上设有相互分离的一条检测线和一条质控线；所述检测线由探针probe2组成，所述质控线由探针Probe1’组成；

所述的探针Probe1、Probe2为：从灿烂弧菌毒力基因序列中选择特征保守区段，以其5’端和3’端分别设计探针Probe1和Probe2，其中Probe1的5’端有巯基修饰，再根据Probe1设计其互补序列Probe1’，所述的探针Probe1、Probe2和Probe1’的序列为：

Probe1：5’-SHAAAAAAGCGGAGCCGCCTGCCGAGTC-3’；

Probe2：5’-ACCCTCCACTATGTATAGTT-3’；

Probe1'：5’-GACTCGGCAGGCGGCTCCGC-3’。

2.一种如权利要求1所述的快速检测水产病害金标核酸试纸条的制备方法，其特征在于，步骤包括：

（1）Probe1-AuNPs复合物的制备：将80-120 µL纳米金溶液和20-40 µL 的1-10μmol/L的probe1混匀反应，再加入混合液继续反应，经离心收集纳米金颗粒；用混合液漂洗、重悬后，最终得到Probe1-AuNPs复合物；

所述混合液是NaCl 和PB的混合液，所述NaCl 浓度为0.05 -0.50mol/L，所述PB浓度为8-12mmol /L；

（2）将步骤（1）制备的Probe1-AuNPs复合物加到玻璃纤维上制备金标垫；

（3）将处理后的硝酸纤维素膜上划上probe2作为检测线，另一端划上Probe1’作为质控线，检测线和质控线之间的间隔为5.0-6.0mm；

（4）按照金标核酸试纸条的结构黏贴好样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，组装完成后，在室温下用重物压实，裁切、密封干燥保存，得到金标核酸试纸条。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1） PB缓冲液的pH值为7.0。