[发明专利]B型产气荚膜梭菌外毒素及其制备方法、产毒培养基和应用

权利要求书

1.B型产气荚膜梭菌产毒培养基，其特征在于，每1000ml所述培养基由以下重量配比的原料制成：

蛋白胨15-25g；

酵母浸粉3-5g；

NaCl 3-4g；

Na₂HPO₄·12H₂O 5-10g；

糊精5-10g或粗糊精5-10g；

其余为注射用水。

2.根据权利要求1所述的B型产气荚膜梭菌产毒培养基，其特征在于，所述培养基的pH值为8.1-8.3。

3.权利要求1或2所述的B型产气荚膜梭菌产毒培养基的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将制备所述培养基的所述原料蛋白胨、酵母浸粉、NaCl、Na₂HPO₄·12H₂O按重量配比加入总体积80％的注射用水中溶解，调节pH值为8.1-8.3后加入重量配比的糊精或粗糊精，定容，高压灭菌，得到所述培养基；所述高压灭菌的条件为116℃高压蒸汽灭菌30min。

4.根据权利要求3所述的B型产气荚膜梭菌产毒培养基的制备方法，其特征在于，所述调节pH值采用2mol/L的氢氧化钠溶液进行调节。

5.B型产气荚膜梭菌外毒素的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

种子液培养：将B型产气荚膜梭菌接种于无糖厌气肉肝汤中，在36-37℃下静置培养12-16h，制得B型产气荚膜梭菌的种子液；

发酵培养：将所述种子液接种于权利要求1或2所述的B型产气荚膜梭菌产毒培养基中进行培养，收获一定时间段的培养物并离心，然后收集上清液并过滤，所得滤液即为所述B型产气荚膜梭菌外毒素；所述发酵培养中所述培养条件为36-37℃静置培养12-14h。

6.根据权利要求5所述的B型产气荚膜梭菌外毒素的制备方法，其特征在于，所述B型产气荚膜梭菌接种的接种量和所述种子液接种的接种量均为1-1.5％(v/v)；和/或

所述发酵培养中所述培养在瓶或发酵罐中培养；和/或

所述离心的转速为3000-4000rpm，时间为20-30min；和/或

所述过滤采用0.22μm滤膜进行过滤。