[发明专利]一种柳珊瑚酸的微生物制备方法

权利要求书

1.Aspergillus sp.EGF15-0-3在制备柳珊瑚酸中的应用，其特征在于，所述Aspergillus sp.EGF15-0-3的保藏号为GDMCC No.60476。

2.一种柳珊瑚酸的微生物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将保藏号为GDMCCNo.60476的Aspergillus sp.EGF15-0-3接种于PDA液体培养基中培养，得种子培养液；将种子培养液移入至发酵培养基中培养，得到柳珊瑚酸。

3.如权利要求2所述的微生物制备方法，其特征在于，所述发酵培养基为以下培养基中的一种：

PDA培养基：葡萄糖2.0％、土豆200g/L、余量为陈海水，盐度3.5％，pH自然；

GPY+CaCO₃培养基：葡萄糖1.0％、酵母膏0.2％、蛋白胨0.1％、海盐0.25％、CaCO₃0.1％，pH＝7.5；

真1培养基：山梨醇5.0％、麦芽糖4.0％、味精1.0％、色氨酸0.05％、酵母膏1.3％、MgSO₄·7H₂O 0.03％、KH₂PO₄ 0.05％、余量为陈海水，pH＝6.5；

固体培养基4：丝苗4g、陈海水80mL、蛋白胨0.3％。

4.如权利要求2所述的微生物制备方法，其特征在于，具体操作为：将保藏号为GDMCCNo.60476的Aspergillus sp.EGF15-0-3接种于PDA液体培养基中，在25～28℃的恒温摇床中以150～170转/分钟的转速培养2～3天，得种子培养液；将种子培养液以1.5％的接种量移入至发酵培养基中，于25～28℃下静置培养48～60天，得到柳珊瑚酸；所述PDA液体培养基由以下成分组成：土豆200g/L、葡萄糖2.0％、余量为陈海水，自然pH。

5.如权利要求3所述的微生物制备方法，其特征在于，发酵培养基为PDA培养基、GPY+CaCO₃培养基、真1培养基时，产物后处理的方法为：发酵培养基用纱布过滤，得到菌丝体和发酵液；将发酵液先后用等体积的乙酸乙酯、正丁醇萃取三次，萃取液进行浓缩，得到发酵液乙酸乙酯相浸膏、发酵液正丁醇相浸膏；将菌丝体用甲醇提取3次，合并甲醇提取液，减压浓缩得到甲醇浸膏，用水涅溶后，先后用等体积的乙酸乙酯、正丁醇萃取三次，得到菌丝体乙酸乙酯相浸膏、菌丝体正丁醇相浸膏。

6.如权利要求3所述的微生物制备方法，其特征在于，发酵培养基为固体培养基4时，产物后处理的方法为：发酵培养基加入等体积的乙酸乙酯振摇萃取3次，萃取液进行浓缩，得到发酵液乙酸乙酯相浸膏。

7.如权利要求5或6所述的微生物制备方法，其特征在于，所述柳珊瑚酸的分离方法为：取菌丝体乙酸乙酯相浸膏或发酵液乙酸乙酯相浸膏经硅胶柱分离，以石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱，得到柳珊瑚酸。