[发明专利]黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物及品种分子鉴定方法

权利要求书

1.黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物，其特征在于，包括12对引物，其引物序列信息如下：

AEcpSSR1正向引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

AEcpSSR1反向引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

AEcpSSR3正向引物如序列表中SEQ ID NO.3所示；

AEcpSSR3反向引物如序列表中SEQ ID NO.4所示；

AEcpSSR4正向引物如序列表中SEQ ID NO.5所示；

AEcpSSR4反向引物如序列表中SEQ ID NO.6所示；

AEcpSSR10正向引物如序列表中SEQ ID NO.7所示；

AEcpSSR10反向引物如序列表中SEQ ID NO.8所示；

AEcpSSR11正向引物如序列表中SEQ ID NO.9所示；

AEcpSSR11反向引物如序列表中SEQ ID NO.10所示；

AEcpSSR12正向引物如序列表中SEQ ID NO.11所示；

AEcpSSR12反向引物如序列表中SEQ ID NO.12所示；

AEcpSSR15正向引物如序列表中SEQ ID NO.13所示；

AEcpSSR15反向引物如序列表中SEQ ID NO.14所示；

AEcpSSR22正向引物如序列表中SEQ ID NO.15所示；

AEcpSSR22反向引物如序列表中SEQ ID NO.16所示；

AEcpSSR24正向引物如序列表中SEQ ID NO.17所示；

AEcpSSR24反向引物如序列表中SEQ ID NO.18所示；

AEcpSSR27正向引物如序列表中SEQ ID NO.19所示；

AEcpSSR27反向引物如序列表中SEQ ID NO.20所示；

AEcpSSR28正向引物如序列表中SEQ ID NO.21所示；

AEcpSSR28反向引物如序列表中SEQ ID NO.22所示；

AEcpSSR31正向引物如序列表中SEQ ID NO.23所示；

AEcpSSR31反向引物如序列表中SEQ ID NO.24所示。

2.根据权利要求1所述的黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物，其特征在于，利用黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物进行黄秋葵品种亲缘关系分析的方法，按下述步骤进行：

(1)提取被测黄秋葵品种的基因组DNA；

(2)将所述的黄秋葵多态性标记引物和所述基因组DNA混合并进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)将所述扩增产物经采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染检测和拍照采集电泳图像，在同一电泳迁移位置上，若有DNA扩增条带记为“1”，若无DNA扩增条带记为“0”，统计结果；

(4)对所述结果进行亲缘关系分析。

3.根据权利要求2所述的黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物，其特征在于，所述PCR扩增体系包括：1μL 10×Buffer[200mM Tris–HCl(pH 8.8)，100mM KCl，100mM(NH₄)₂SO₄，20mM MgCl₂，1％TritonX-100]，0.8μL dNTPs(10mmol/L)，上、下游引物各1μL，0.5μL Taq酶(2U/μL),1μL模板DNA(50ng/μL)，4.7μL ddH₂O；所述PCR扩增体系的总体积为10μL。

4.根据权利要求2所述的黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物，其特征在于，所述PCR扩增的步骤包括：

94℃预变性5min；

94℃变性45s，不同引物Tm值复性45s，72℃延伸1.5min，35个循环；

72℃延伸10min。

5.根据权利要求2所述的黄秋葵叶绿体微卫星多态性标记引物，其特征在于，所述非变性聚丙烯酰胺凝胶的质量分数为8％。