[发明专利]一种超高效合相色谱-质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法

权利要求书

1.一种超高效合相色谱-质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待测生物样本、内标工作液和沉淀剂混合依次进行蛋白沉淀和离心，将离心所得上清液作为待测液；所述待测生物样本中包含有左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑；

(2)对待测液进行超高效合相色谱-质谱联用检测，得到谱图，根据左旋兰索拉唑和内标物的峰面积以及第一标准曲线，通过内标法计算得到待测生物样本中左旋兰索拉唑的浓度；所述第一标准曲线为左旋兰索拉唑对照品的浓度与左旋兰索拉唑对照品和内标物峰面积比值的关系曲线；

根据右旋兰索拉唑和内标物的峰面积以及第二标准曲线，通过内标法计算得到待测生物样本中右旋兰索拉唑的浓度；所述第二标准曲线为右旋兰索拉唑对照品的浓度与右旋兰索拉唑对照品和内标物峰面积比值的关系曲线；

所述超高效合相色谱-质谱联用检测用质谱为三重四级杆质谱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中待测生物样本的基质包括血浆、组织、尿液、胆汁或粪便。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的沉淀剂包括甲醇和/或乙腈；

所述内标工作液中内标物的浓度为10～1000ng/mL；

所述待测生物样本和沉淀剂的体积比为1:1～3。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标工作液用内标物为格列吡嗪。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一标准曲线和第二标准曲线的由以下步骤得到：

将含左旋兰索拉唑对照品和右旋兰索拉唑对照品的混合线性工作液与空白生物基质、内标工作液和沉淀剂混合后依次进行蛋白沉淀和离心，离心所得上清液作为线性待测液；

使用超高效合相色谱-质谱联用仪对线性待测液进行检测，以左旋兰索拉唑对照品的浓度为横坐标，左旋兰索拉唑对照品峰面积和内标物峰面积的比值为纵坐标绘制第一标准曲线；以右旋兰索拉唑对照品的浓度为横坐标，右旋兰索拉唑对照品峰面积和内标物峰面积的比值为纵坐标绘制第二标准曲线。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述第一标准曲线和第二标准曲线的线性范围独立的为0.1～5000ng/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效合相色谱-质谱联用检测的色谱条件为：色谱柱型号为ACQUITY UPCC Trefoil^TM CEL2、ACQUITYUPCC Trefoil^TM CEL1或ACQUITY UPCC^TM Torus Diol；柱温范围为25～40℃；流动相为超临界CO₂和甲醇的混合液；所述流动相的流速为0.8～1.5mL/min；所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱；补偿液为甲酸-甲醇混合液；所述补偿液中甲酸的体积含量为0.1～0.5％；所述补偿液的流速为0.1～0.5mL/min；备压为800～2000psi；进样量为1～7.5μL。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效合相色谱-质谱联用检测的质谱条件为：电喷雾电源，正离子模式，多重反应检测，毛细管电压：0.5～4.0kv；离子源锥孔电压：30～60V；去溶剂化温度：300～700℃；脱溶剂气流:500～1000L/h；锥孔气流：5～20L/h；所述左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的检测离子对为370.12→252.08、370.12→119.14、370.12→136.09、370.12→107.16或370.12→205.09，化合物锥孔电压为15～30，碰撞能量为10～35。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述格列吡嗪的检测离子对为468.16→369.07、468.16→342.92、468.16→121.81、468.16→126.99或468.16→174.08，化合物锥孔电压为30～50，碰撞能量为10～30。