[发明专利]一种超高效合相色谱-质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法

说明书

本发明提供了一种超高效合相色谱‑质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法。本发明将待测生物样品进行前处理后，对待测液进行超高效合相色谱‑质谱联用检测，再根据检测谱图中左旋兰索拉唑/右旋兰索拉唑和内标物的峰面积以及标准曲线，通过内标法计算得到待测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的浓度。本发明首次将超高效合相色谱(UPCC)与三重四级杆质谱(MS/MS)联用用于生物样本中手性药物的定量检测，本发明提供的方法灵敏度高，可满足具有样本量少、含量低以及基质复杂特点的生物样本中手性药物的分离，且检测时间短、成本低。

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种超高效合相色谱-质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法。

背景技术

手性药物(Stereoisomeric Drugs)是指分子结构中含有手性中心或不对称中心的药物，它包括单一的对映异构体、2个或2个以上对映异构体的混合物。这些对映异构体的理化性质基本相似，仅仅是旋光性有所差别。研究表明，约60％的常用药物中具有1个或1个以上手性中心，而美国药典所列出的2000多种常用药物中约50％属于手性药物。手性药物市场还在逐年扩大，手性药物已经成为新分子实体研究开发的重要方向。在人体环境中，很多内源性大分子物质，如酶、载体、受体、血浆蛋白等都具有手性特征。手性药物与体内大分子物质相互识别、相互作用，发生立体选择性导致对映体的药理活性和毒理活性表现出多样性。其药理学及毒理学的多样性大致可分为以下几种情况：两对映体活性及程度相同；两对映体中，一个有活性，另一个没有活性甚至有严重毒副作用；两对映体具有完全不同甚至相反的药理活性；两对映体有相同的药理活性，但活性程度不同；两对映体的药理活性不同，但合并用药有利。基于以上手性药物的上述特点，对其进行深入的研究和质量控制十分必要。

手性药物新药在临床前和临床研究中，药代动力学和毒代动力学的研究结果是手性药物成药性的关键，因此生物样本中手性药物贯穿临床前和临床研究的始终。生物样本中手性药物检测首先要实现手性药物分离，色谱技术是目前手性药物分离的主要方法，常用的色谱技术包括高效液相色谱法 (UPLC)、气相色谱(GC)、高效毛细管电泳(HPCE)、超临界流体色谱(SPF)等。以上几种方法均具有明显的优缺点。其中GC和HPCE均具有高效和高灵敏度的优点，但是适用范围窄。HPLC的优势是应用最广泛，不需要高温，减少异构化，但是通常是正相模式分离，流动相通常为正己烷和异丙醇或其它正相溶剂，不兼容质谱。SFC兼具GC和HPCE高分离效率和HPLC适用范围广的优点，但需在高压下操作，对设备和技术要求高。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种超高效合相色谱-质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法。本发明提供的方法可使手性药物在短时间内分离，检测成本低，无环境污染，检测精度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种超高效合相色谱-质谱联用定量检测生物样本中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法，包括以下步骤：

(1)将待测生物样本、内标工作液和沉淀剂混合依次进行蛋白沉淀和离心，将离心所得上清液作为待测液；所述待测生物样本中包含有左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑；

(2)对待测液进行超高效合相色谱-质谱联用检测，得到谱图，根据左旋兰索拉唑和内标物的峰面积以及第一标准曲线，通过内标法计算得到待测生物样本中左旋兰索拉唑的浓度；所述第一标准曲线为左旋兰索拉唑对照品的浓度与左旋兰索拉唑对照品和内标物峰面积比值的关系曲线；

根据右旋兰索拉唑和内标物的峰面积以及第二标准曲线，通过内标法计算得到待测生物样本中右旋兰索拉唑的浓度；所述第二标准曲线为右旋兰索拉唑对照品的浓度与右旋兰索拉唑对照品和内标物峰面积比值的关系曲线；

所述超高效合相色谱-质谱联用检测用质谱为三重四级杆质谱。