[发明专利]一种脂蛋白(a)的制备方法

说明书

本发明适用于生物检测技术领域，提供了一种脂蛋白(a)的制备方法，包括如下步骤：向血清中加入大分子化合物和金属离子，混匀后离心，然后取一次沉淀；向一次沉淀中加入缓冲液，再加入金属离子进行搅拌溶解，溶解后进行离心，取上清液；向上清液中加入非选择性沉淀剂，反应完全后进行离心，然后取二次沉淀；向二次沉淀中加入缓冲液，然后加入金属离子，溶解沉淀，得到脂蛋白(a)，再进行纯化。借此，本发明能够提高脂蛋白(a)的制备速率，制备成本低、时间短，纯化产物产出量高。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种脂蛋白(a)的制备方法。

背景技术

脂蛋白(a)是由类似于脂蛋白和载脂蛋白(a)组成的一种特殊脂蛋白，在肝脏中合成，主要的功能是阻止血管内血块溶解，促进动脉粥样硬化形成。脂蛋白水平持续升高与心绞痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系。目前，绝大多数脂蛋白(a)测定方法是免疫测定法，在测定时需要一定纯度及完全活性的脂蛋白(a)作为标准品。

现有技术中，脂蛋白(a)的制备方法主要有植物凝集素法，超速离心法和琼脂糖电泳法等，这些方法都需要用到超速离心机，超速离心机在使用过程中，需要20个小时左右才能够将脂蛋白(a)或者脂蛋白(a)的中间制备产物分离，耗时较长；同时，超速离心机一般价格昂贵，且使用寿命比较短，提高了制备成本；这些方法在实施过程中需要用到包括超速离心机在内的多种仪器，操作繁琐，对工作人员的技术要求高；另外，现有技术制备的脂蛋白(a)产量比较低，一般为50％左右。

综上可知，现有技术在实际应用中显然存在不足之处，有必要加以改进。

发明内容

针对上述技术缺陷，本发明的目的在于提供一种脂蛋白(a)的制备方法，其采用大分子化合物沉淀脂蛋白(a)，使用的仪器、设备和试剂耗材少，制备成本低，操作简单，适合脂蛋白(a)的批量纯化；脂蛋白(a)的制备可在2小时内完成，制备时间短，效率高；纯化产物产出量高，在87.3％以上。

为了实现上述目的，本发明提供一种脂蛋白(a)的制备方法，包括如下步骤：

步骤一沉淀脂蛋白(a)

向血清中加入大分子化合物和金属离子，大分子化合物的浓度为0.1～10％，然后混匀，混匀后离心，然后取一次沉淀。

步骤二沉淀的溶解

向所述一次沉淀中加入缓冲液，缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L；再加入金属离子进行搅拌溶解，溶解后进行离心，然后取上清液。

步骤三化合物及金属离子的去除

向所述上清液中加入非选择性沉淀剂，进行沉淀反应，非选择性沉淀剂的浓度为1.0～5.0％，非选择性沉淀剂的加入量为上清液体积的8～12％；反应完全后进行离心，然后取二次沉淀；

向所述二次沉淀中加入缓冲液，然后加入金属离子，溶解沉淀，得到脂蛋白(a)。

步骤四纯化脂蛋白(a)

采用国家标准检测方法对步骤三中的脂蛋白(a)进行纯化，并计算纯化产出量。

根据本发明的一种脂蛋白(a)的制备方法，所述金属离子的浓度为0.01～0.1mol/L。

根据本发明的一种脂蛋白(a)的制备方法，所述金属离子为NaCl、KI、KCL、NaI、KBr、MgCl₂、CaCl₂、MnCl₂中的任意一种。

根据本发明的一种脂蛋白(a)的制备方法，所述金属离子为MgCl₂、CaCl₂、MnCl₂中的任意一种。