[发明专利]一种重组人IL-21蛋白及其制备和应用

权利要求书

1.一种重组人IL-21蛋白的制备方法，其特征在于，提取Tfh细胞的总mRNA并逆转录为cDNA作为PCR扩增模板，设计引物扩增人IL-21基因，引入酶切位点；对载体质粒及目的片段双酶切，经连接酶构建重组质粒；构建成功的重组质粒转染入HEK293F细胞，之后大批量悬浮培养HEK293F细胞，收集培养基上清内蛋白进行纯化获得重组人IL-21蛋白；所述的重组人IL-21蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，扩增人IL-21基因的引物序列为：

上游引物：5’-CGGATCCCCTGGTCCACAAATCAAGCTCC-3’,

下游引物：5’-CCTCGAGGGGAATCTTCACTTCCGTGTGTTCTA-3’。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，分别在上游引物引入Bam H I内切酶位点，下游引物引入Xho I内切酶位点。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的载体质粒包括：pSecTag2。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，收集培养基上清内蛋白用His纯化柱进行初步纯化，再利用分子筛进行再次纯化及脱盐浓缩，得到纯度在90%以上的重组人IL-21蛋白。

6.一种权利要求1-5任一项方法制备而成的重组人IL-21蛋白，所述的重组人IL-21蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

7.权利要求6所述的重组人IL-21蛋白在制备抑制外周血单个核细胞分泌外泌体制剂中的应用。