[发明专利]一种呼吸道病毒核酸的检测方法和便携式病毒核酸检测仪在审
申请号: | 201811488492.8 | 申请日: | 2018-12-06 |
公开(公告)号: | CN109536640A | 公开(公告)日: | 2019-03-29 |
发明(设计)人: | 王升启;荣振;肖瑞 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6837;C12M1/34;C12R1/93 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人: | 郭新娟 |
地址: | 100000 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 反应孔 生物芯片 核酸 病毒核酸检测 生物芯片检测 图像采集处理 呼吸道病毒 核酸杂交 标记液 检测 聚合酶链式反应 病毒 图像 设备采集 输出检测 杂交探针 滴入 | ||
1.一种呼吸道病毒核酸的检测方法,其特征在于,包括:
从血液样本或咽拭子样本中提取核酸;
对所述核酸进行聚合酶链式反应PCR扩增,得到PCR产物;其中,进行PCR扩增所使用的引物为生物素化的引物;
将经过PCR扩增后得到的所述PCR产物加入到生物芯片上的反应孔,所述反应孔内设置有杂交探针点样,不同的所述杂交探针点样在所述反应孔中的位置是预先设定的,进行核酸杂交;
将标记液滴入所述反应孔,使核酸杂交后的PCR产物与标记液进行反应;
将所述生物芯片设置于便携式生物芯片检测样品台上,由安装于所述病毒检测样品台上的图像采集处理设备采集包含生物芯片的反应孔的图像;如果被检测病毒为阳性,则该图像中包含有表征病毒的量子点荧光图像;
所述图像采集处理设备对所述图像进行处理,检测是否包含有病毒以及所包含有的病毒的种类和数量,输出检测结果。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述对所述核酸进行扩增的条件为:在温度为94℃的条件下,变性10s;在温度为55℃条件下,退火20s;在温度为72℃的条件下,延伸20s;并且,按照该扩增条件执行变性、退火和延伸的整个过程的循环次数为35-45次。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述按照该扩增条件执行变性、退火和延伸的整个过程的循环次数为40次。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述将标记液滴入所述反应孔,使核酸杂交后的PCR产物与标记液进行反应,包括:
取容积为10uL,浓度为2.5nM-30nM的用于亲和素标记的红色量子点复合物QDs–SA标记液,滴加于所述生物芯片反应孔,使核酸杂交后的PCR产物与所述标记液进行反应。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述将标记液滴入所述反应孔,使核酸杂交后的PCR产物与标记液进行反应,包括:
取容积为10uL,浓度为25nM的用于亲和素标记的红色量子点标记的链霉亲和素复合物QDs–SA标记液,滴加于所述生物芯片反应孔,使核酸杂交后的PCR产物与标记液进行反应。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述进行核酸杂交以后,还包括:
使用磷酸盐吐温缓冲液对所述生物芯片进行清洗。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述使核酸杂交后的PCR产物进行反应之后,还包括:
使用磷酸盐吐温缓冲液对所述生物芯片进行清洗。
8.一种便携式生物芯片检测样品台,其特征在于,包括:盒体,所述盒体正面设置有图像采集处理设备安装部件,所述图像采集处理设备安装部件上设置有镜头拍摄通孔,所述盒体内部设置有生物芯片承载部件,用于承载于所述生物芯片,所述盒体的内部还设置有紫外灯、帯通滤光片和紫外滤光片。
9.一种便携式病毒核酸检测仪,其特征在于,包括:如权利要求8所述的便携式生物芯片检测样品台和安装于所述图像采集处理设备安装部件的图像采集处理设备,所述图像采集处理设备用于在进行图像采集时,触发所述紫外灯进行照射生物芯片,所述生物芯片上的量子点经紫外灯照射后被激发产生荧光信号,所述荧光信号经过所述滤光片过滤之后,被所述图像采集处理设备采集,此时图像采集处理设备采集包含生物芯片的反应孔的图像;该图像中包含有表征病毒的量子点荧光图像。
10.根据权利要求9所述的检测仪,其特征在于,所述图像采集处理设备为移动终端,所述移动终端包含有摄像头,在所述摄像头上设置平凸透镜和带通滤光片;
所述移动终端用于根据采集到的图像中的量子点荧光图像进行计算出所包含的病毒的数量,以及根据所述量子点荧光图像分布的位置确定所包含的病毒的种类。
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