[发明专利]一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒

权利要求书

1.一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒包括：

30倍浓缩洗涤液、酶标试剂、酶标包被板、样品稀释液、显色剂A、显色剂B、终止液、标准品、标准品稀释液、质谱仪；

终止液为HCl和H₂SO₄；

显色剂A由：PBS缓冲液，柠檬酸，ED-TA乙二氨四乙酸，ProcLin-300，过氧化氢(过氧化氢挥发性太高，容易丢失，我们现在正用过氧化脲来代替，效果还不错)组成；

显色剂B由：PBS缓冲液，柠檬酸，ED-TA乙二氨四乙酸，ProcLin-300，硫代硫酸钠等。

2.如权利要求1所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒检测方法如下：

步骤一，标准品加入标准品稀释液进行稀释；

步骤二，加样；

分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；

步骤三，用封板膜封板后置37℃温育30分钟；

步骤四，将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用；

步骤五，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干；

步骤六，每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外；重复步骤三和步骤五操作；

步骤七，每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟；

步骤八，每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)；

步骤九，利用高效液相串联质谱仪对上述液体进行检测，得到血液中LBP色谱图，计算人类血液中LBP含量数据。

3.如权利要求1所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述LBP基因标签单核甘酸多态性位点的检测方法如下：

1)特异性引物的设计

根据被证实的LBP基因标签单核甘酸多态性位点，设计特异性扩增引物和测序引物，其中，所述特异性扩增引物中的一条用生物素标记；

2)PCR扩增

以待测标本的DNA为模板，用步骤1)所述的特异性扩增引物进行PCR反应，得PCR扩增物；

3)焦磷酸测序

将步骤2)所得PCR扩增物采用碱变性使其分开成单链，取其中被生物素标记的单链PCR扩增产物纯化后，与步骤1)所述测序引物进行杂交反应，并分析结果以判断所述待测标本的靶单核甘酸是否具备多态性。

4.如权利要求1所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液包括：缓冲溶液、白蛋白，所述白蛋白的含量为10～100g/L、碱金属氯化物、任选的乳化剂；并且所述稀释液的pH值为6.0～8.0。

5.如权利要求4所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述白蛋白选自：血清蛋白、乳清蛋白、卵清蛋白。

6.如权利要求4所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述缓冲溶液选自：磷酸缓冲溶液(PB)、磷酸盐缓冲溶液(PBS)、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液(Tris-HCl)或其组合。

7.如权利要求4所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述稀释液还包括选自下组的一种或多种组分：

(a)金属离子螯合物；

(b)碱金属硫酸盐；

(c)防腐剂。

8.如权利要求4所述用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，其特征在于，所述稀释液具有以下的一种或多种特性：

(a)所述稀释液在室温下的电导率ρ为0.55×10⁴～0.75×10⁴μS/cm；

(b)所述稀释液为待测样本提供的渗透压为250～380mOsm/Kg；

(c)所述稀释液的pH为7.2～7.8。