[发明专利]一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒

说明书

本发明属于试剂盒技术领域，公开了一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒，用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒包括：30倍浓缩洗涤液、酶标试剂、酶标包被板、样品稀释液、显色剂A、显色剂B、终止液、标准品、标准品稀释液、质谱仪；本发明通过采用高特异性引物和适宜方法的组合，能够实现快速、简便、准确、高效、实用、经济的检测LBP基因标签SNP基因型，可用于LBP基因在疾病遗传易感性的关联研究，利于LBP基因标签SNP检测预测疾病的发生、发展风险；同时，提供的稀释液检测结果精确可靠，分散效果良好，可长期稳定保存，并且可通用于不同的临床免疫诊断项目的血清或血浆样本稀释液，对于临床医学诊断具有重要意义。

技术领域

本发明属于试剂盒技术领域，尤其涉及一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒。

背景技术

脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)又称内毒素，是革兰阴性细菌外膜的主要成分。LPS与急性期蛋白脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharidebindingprotein，LBP)结合，可导致炎症反应失控及免疫防御屏障机能下降，引起全身炎性反应综合征、脓毒性休克、急性肺损伤甚至多器官功能障碍综合征。脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharidebindingprotein,LBP)是一种分子量为60kDa,456个氨基酸组成的糖蛋白，以单链多肽的形式在肝细胞内合成，它属于I型急性期反应蛋白，存在于人和动物的血清中。LBP既可将细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)多聚体转换为单聚体,加速LPS与其受体CD14结合,显著放大LPS的致炎作用；也可加速LPS与靶细胞膜上的清除受体结合,使LPS被靶细胞清除；还可催化LPS与脂蛋白结合,后者可中和LPS的生物学活性,加速体内LPS的清除。然而，现有用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒不能检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点，功能单一；同时，现有血清或血浆样本粘稠度都较高，采用单纯采用人阴性血清或血浆、小牛血清进行稀释，受检测时间限制，往往难以稀释混合均匀，导致检测结果容易存在一定的偏差。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒不能检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点，功能单一；同时，现有血清或血浆样本粘稠度都较高，采用单纯采用人阴性血清或血浆、小牛血清进行稀释，受检测时间限制，往往难以稀释混合均匀，导致检测结果容易存在一定的偏差。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒。

本发明是这样实现的，一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒包括：

30倍浓缩洗涤液、酶标试剂、酶标包被板、样品稀释液、显色剂A、显色剂B、终止液、标准品、标准品稀释液、质谱仪；

终止液为HCl和H₂SO₄；

显色剂A由：PBS缓冲液，柠檬酸，ED-TA乙二氨四乙酸，ProcLin-300，过氧化氢(过氧化氢挥发性太高，容易丢失，我们现在正用过氧化脲来代替，效果还不错)组成；

显色剂B由：PBS缓冲液，柠檬酸，ED-TA乙二氨四乙酸，ProcLin-300，硫代硫酸钠等。

一种用质谱仪检测人类血液中LBP含量的试剂盒检测方法如下：

步骤一，标准品加入标准品稀释液进行稀释；

步骤二，加样；

分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；

步骤三，用封板膜封板后置37℃温育30分钟；