[发明专利]一种鲜蜂王浆中氟喹诺酮类成分的检测方法

说明书

本发明涉及蜂王浆检测技术领域的一种鲜蜂王浆中氟喹诺酮类成分的检测方法，包括样品前处理：提取‑净化‑上清液处理；样品检测：利用氟诺喹酮类药物的检测试剂盒检测。本申请旨在提供一种前处理操作简单的氟喹诺酮类成分的检测方法。

技术领域

本发明涉及蜂王浆检测技术领域，尤其涉及一种鲜蜂王浆中氟喹诺酮类成分的检测方法。

背景技术

蜂蜜是由蜜蜂采集花蜜而来，富含人体必须的各类营养物质，如葡萄糖、果糖、氨基酸、酶类、矿物和抗氧化物质等，是重要的天然食品。蜂王浆是由工蜂的舌腺和上颚腺分泌的混合物质，具有非常好的保健和药用价值。然而，实际生产中蜜蜂容易受到细菌、真菌、病毒和外来寄生螨类的侵染而引起病害。控制和治疗这些疾病通常的方法是直接饲喂兽药或者在蜂巢中喷洒兽药，因此可能导致蜂蜜和蜂王浆等蜂产品中的兽药残留问题，对消费者造成潜在威胁。

喹诺酮类药物作为一种常用抗生素类兽药，在养蜂生产中通常用来防治和治疗各类细菌疾病，尤其是可以有效地防治美洲幼虫腐臭病引起的蜜蜂数量减少和蜂蜜产量降低。

目前，一些文献中报道了蜂蜜或蜂王浆中喹诺酮类药物残留的检测方法，主要有液相色谱法和液相色谱-串联质谱法，因液相色谱-串联质谱法检出限低、灵敏度和精确度高而广泛使用，它也是我国蜂蜜和蜂王浆中的规定方法。前处理方法多采用固相萃取技术，因其都需要分别经过净化、浓缩等一些列过程，操作复杂、费时费力，灵敏度和重复性差。目前，很少有能够简单、快速的样品前处理方法用于检测蜂王浆中喹诺酮类药物残留。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鲜蜂王浆中氟喹诺酮类成分的检测方法，具有样品前处理简单、快速的优点。

本发明的上述目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种鲜蜂王浆中氟喹诺酮类成分的检测方法，包括如下的检测步骤，

（1）样品前处理：

步骤1：提取，称取2g鲜蜂王浆样品至50ml离心管中，在离心管中加入5.0ml乙酸锌溶液震荡5min溶解样品，向样品溶液中加入10ml乙酸乙酯，震荡提取10min后，加入1.0g氯化钠和4.0g无水硫酸锌，涡动1min后，震荡5min，8000-10000rpm条件下离心5min；

步骤2：净化，准确移取上清液5.0ml于装有500 mg PSA 的15 mL 离心管中，振荡5min，6000rpm 离心5 min，取上清液1.0 mL 于2 mL 离心管中30℃下氮气吹干；

步骤3：上清液氮气吹干后，向离心管中加入500 μL 碳酸钠溶液（0.1 mM，pH=10.5）涡旋复溶，再加入500μL丹磺酰氯-丙酮溶液（1.0 mg/mL）立刻涡旋混匀；于60 ℃加热15 min；衍生化结束后，置于4 ℃冰箱冷藏10 min；最后样品溶液过0.2 μm 滤膜；

样品检测：利用氟诺喹酮类药物的检测试剂盒检测。

实施上述技术方案，蜂王浆样品中基质复杂，含有蛋白质、脂肪、乳糖、有机酸和氨基酸等干扰物，有效的脱脂、去蛋白作用直接决定提取的效率。而在溶解蜂王浆样品的过程中，对比纯水和乙酸锌溶液溶解基质的效果，仪器分析结果显示纯水作为溶解剂时出现更多的杂质干扰峰，影响目标化合物的准确定量；而使用乙酸锌溶液作为溶解剂时，因为其提供的高浓度酸根离子可以夺去蛋白质表面的水花层，蛋白质胶粒“失水”，进而凝结并沉淀析出，另一方面，蛋白质在等电点的溶解度最小，而乙酸锌缓冲溶液所提供的酸性pH接近蜂王浆中大部分蛋白质的等电点，从而也加速了蛋白质析出沉淀，起到净化基质的效果。

此外，向溶液中加入氯化钠和无水硫酸锌能够起到盐析作用，提高离子强度，加深沉淀物与上清液分离，并增大对目标化合物的提取效率。