[发明专利]一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，其特征在于：所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上。

2.根据权利要求1所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述胶体金垫上包含有胶体金标记的通用型HA单克隆抗体mAb1，浓度为8～12μg/mL。

3.根据权利要求2所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述胶体金的最大吸收波长为510～550nm。

4.根据权利要求1所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有另外一株不同表位的通用型HA单克隆抗体mAb2，浓度为0.8～1.8mg/mL，划膜量为1ul/cm；质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为0.8～1.8mg/mL，划膜量为1ul/cm。

5.根据权利要求4所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述检测线和质控线间隔距离为3～5mm，检测线在质控线的下方。

6.根据权利要求1所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维材质，胶体金垫为玻璃纤维材质，包被膜为硝酸纤维素NC材质，底板为PVC胶板材质，吸水垫为滤纸材质。

7.一种根据权利要求1所述的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：主要包括以下步骤：

步骤一、胶体金的制备

采用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备胶体金，将质量百分浓度为1％的氯金酸溶液和质量百分浓度为1％的柠檬酸三钠溶液按1:1-1:2体积比混合煮沸，制备浓度为0.01％的胶体金溶液；用紫外-可见光分光光度计进行全波长扫描；

步骤二、胶体金垫的制备

每ml步骤一中得到的胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾溶液2-4ul调整pH，然后加入8-12ug通用型HA单克隆抗体mAb1，混合均匀，保持2-8℃静置反应过夜，继续加入1％BSA，封闭1小时以上，以10℃、10000rpm离心20分钟，弃上清；沉淀用含20mM Tris、10％蔗糖、1％BSA，pH8.0-8.5的溶液复溶至原胶体金体积的1/10，将复溶后的原胶体金标记物用专用设备按5-10μl/cm喷涂在玻璃纤维上，置于烘箱中37℃鼓风干燥1小时，得到胶体金垫；

步骤三、包被膜的制备

将通用型HA单克隆抗体mAb2用pH7.2-7.4的20mM PBS调节至浓度为0.8-1.8mg/mL，1ul/cm划线在NC膜的检测线处；将羊抗鼠IgG用pH7.2-7.4的20mM PBS调节至浓度为0.8-1.8mg/mL，1ul/cm划线在NC膜的质控线处，置于烘箱中37℃鼓风干燥1小时，得到包被膜；

步骤四、样品垫的制备

将含有50mM Tris、1％PVP、0.5％NaCl、1％Brij35、pH8.5-9.0的处理液均匀涂布在玻璃纤维素上，置于空气湿度低于40％的条件下，室温自然晾干，得到样品垫；

步骤五、试纸条的组装

在底板上顺次相互搭接地粘贴样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫，制作试纸大板，用专用切条机切割成所需宽度的试纸条。

8.一种根据权利要求1-7任一项所述的胶体金试纸条的使用方法，其特征在于：所述的胶体金试纸条，在使用时，组装在配套的塑料外壳中，制作成检测卡，检测卡设有加样孔和观察窗，加样孔对应于所述胶体金试纸条的样品垫，观察窗对应于所述胶体金试纸条的检测线和质控线，检测样本时，先将检测卡置于干净平坦的台面上，然后垂直缓慢滴加100ul人血液样本于检测卡的加样孔处，等待15分钟后，在观察窗处根据检测线和质控线的显色情况判读结果。