[发明专利]一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

权利要求书

1.一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16692。

2.抗重金属铅离子单克隆抗体，其特征在于，它由保藏编号为CGMCC No.16692的杂交瘤细胞株分泌产生。

3.杂交瘤细胞株CGMCC No.16692或者其分泌的抗重金属铅离子单克隆抗体在铅离子免疫检测中的应用。

4.一种分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求1所述的杂交瘤细胞株，包括以下步骤：

(1)铅离子人工抗原的合成：

称取5-8mg 2-S-(2-氨基苯)-1，4，7三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸，溶解于2mL0.01mol·L^-1、pH 7.4 4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液，制得螯合剂溶液，此溶液为A液；

称取124.2mg硝酸铅溶解于5mL超纯水中，制得浓度为7.5×10^-2mol·L^-1的硝酸铅溶液，此溶液为B液；

将150～200μL的B液加入到A液中，室温下避光反应3～5h，此反应液为C液；

向C液中加入500～800μL，20mmol·L^-1的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此反应液为D液；

称取20～30mg牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA溶解于3mL HEPES，室温下磁力搅拌混匀，此反应液为E液；

将D液加入到E液中，室温下避光反应24h，后加入150～200μL硼氢化钠溶液，室温下避光反应1h；

反应液先用8KD的透析袋透析3～5次，再用30KD的超滤离心管7000～9000r·min^-1离心洗涤3～5次，每次15～20min，用5～10mL的0.01mol·L^-1，pH 7.4的HEPES溶液复溶，后分装，-20℃低温保存，制得重金属铅人工抗原Pb-L₁-BSA或者Pb-L₁-OVA，L₁表示2-S-(2-氨基苯)-1，4，7三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸；

合成路线为：

(2)小鼠的免疫：

选择BALB/C小鼠进行免疫，将制备的重金属铅人工抗原Pb-L₁-BSA与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后，通过腹部和腋下多点注射，后每间隔一定时间进行加强免疫，3次加强免疫后采血测定效价，当效价不再明显升高时进行最后末免，末免3天后进行细胞融合；

(3)细胞融合与细胞株筛选：

通过聚乙二醇法将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按照5～10:1的比例进行融合，加入培养基培养，间接ELISA筛选抗体阳性孔，对抑制效果好的杂交瘤细胞用有限稀释法进行3～4次克隆，筛选后获得杂交瘤细胞株2C8。

5.抗重金属铅离子单克隆抗体的制备方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求2所述的单克隆抗体，包括以下步骤：

在BALB/C小鼠腹腔注射降植烷0.3ml/只，7～10天后，注射筛选到的2C8单克隆细胞株细胞，待小鼠腹腔明显胀大后无菌操作抽取腹水，离心除去油脂沉淀后，即得小鼠腹水McAb；

腹水纯化后，得到纯化单克隆抗体。