[发明专利]一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用；该杂交瘤细胞株能够分泌抗重金属铅离子单克隆抗体，本发明还提供了该杂交瘤细胞株的制备方法，和该抗重金属铅离子单克隆抗体的制备方法；本发明制备得到的单克隆抗体特异性较强，对铅离子具有较好地灵敏度，IC₂₀值为0.45 ng·mL^‑1，能够用于快速、准确地检测重金属铅离子。该抗铅离子单克隆抗体可以用于环境样品中铅离子的残留检测。

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

重金属污染主要指铅、镉、汞、镍、铬、砷、锌、铜等污染物对环境的污染。重金属分布广泛、难以降解，可通过大气、水、食物链进入人体，与体内蛋白质及各种酶发生作用，使它们失去活性，并在某些器官中富集，如果超过人体所能耐受的限度，会造成人体急性或慢性中毒，具有致癌、致畸及致突变作用，对人体具有很大的危害。因此，加强重金属在环境、农产品和食品中残留检测成为保障重金属安全的重要手段，而新形势下检测新技术的研究和开发显得尤为迫切。

传统的重金属检测方法主要采用原子吸收光谱分析(Atomic AbsorptionSpectroscopy，AAS)、电感耦合等离子发射光谱(InductiveLy CoupLedpLasma AtomicEmission Spectroscopy，ICP-AES)、阳极溶出伏安法(Anodic Stripping VoLtammetry，ASV)、色谱法和各种联用检测方法。这些方法虽然能对各种环境样品中的重金属离子进行有效分析，但大多需要大型仪器，分析方法成本高，样品需要经过消解，分析时间长，不适于重金属的现场快速检测，难以适应环境及市场产品的现场抽查、生产企业自查及产品进出口快速通关的要求。

免疫学检测技术具有检测速度快、分析容量大、费用低廉、仪器简单易携、使用人员技术要求不高，容易普及和推广、灵敏度高和选择性强等优点，尤其适合现场筛选和大量样品的快速分析，已成为21世纪最具竞争性和挑战性的检测分析技术。

重金属离子免疫学检测的关键在于抗重金属特异性抗体的制备，而特异性抗体制备的关键又在于优质重金属免疫原的合成，因此，如何制备优质重金属人工抗原，如何制备抗重金属特异性抗体，建立更快速、更经济的免疫分析法检测重金属离子成为需要解决的问题。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，本发明提供一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

一株分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16692。

抗重金属铅离子单克隆抗体，它由保藏编号为CGMCC No.16692的杂交瘤细胞株分泌产生。

杂交瘤细胞株CGMCC No.16692或者其分泌的单克隆抗体在铅离子免疫检测中的应用。

本发明采用以下技术方案：

一种分泌抗重金属铅离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，该方法用于制备以上所述的杂交瘤细胞株，包括以下步骤：

(1)杂环类双功能螯合剂铅离子人工抗原的合成及鉴定：

称取5～8mg 2-S-(2-氨基苯)-1，4，7三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸(简写为o-NH₂-Bn-NOTA)，溶解于2mL 0.01mol·L^-1、pH7.4 4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液，制得螯合剂溶液，此溶液为A液；

称取124.2mg硝酸铅溶解于5mL超纯水中，制得浓度为7.5×10^-2mol·L^-1的硝酸铅溶液，此溶液为B液；