[发明专利]一种环状RNA hsa-circ-0044506及其特异性扩增引物和应用

权利要求书

1.一种环状RNA，其特征在于，所述环状RNA在circ-RNA数据库中的全称为hsa-circ-0044506，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述环状RNA用作筛查乳腺癌的分子标志物的用途。

3.用于扩增权利要求1所述环状RNA的特异性扩增引物，其特征在于，所述特异性扩增引物包括上游引物和下游引物，其中，

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

4.一种扩增权利要求1所述环状RNA的方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1，合成第一链cDNA：混合原料，所述原料包括权利要求1所述环状RNA、随机引物、ddH₂O、dNTP混合液、反转录缓冲液、RNA酶抑制剂、反转录酶，按照第一程序控温反应；

步骤2，对步骤1制得的第一链cDNA进行实时荧光定量聚合酶链式反应扩增：配制扩增体系，所述扩增体系包括步骤1制备的cDNA、如权利要求3所示的上游引物、如权利要求3所示的下游引物、ddH₂O、qPCR扩增荧光染料Mix，按照第二程序控温反应。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1中，

所述原料的按照如下配比混合：1μl权利要求1所述环状RNA，1μl随机引物，10μl ddH₂O，2μl dNTP混合液，4μl反转录缓冲液，1μl RNA酶抑制剂，1μl反转录酶，其中，所述dNTP混合液包括dATP，dGTP，dCTP和dTTP；

所述第一程序为：25℃条件下反应5min，42℃条件下反应60min，最后在70℃条件下反应5min。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2中，

所述扩增体系按照如下配比配制：2μl步骤1制备的cDNA，0.5μl如权利要求3所述的上游引物，0.5μl如权利要求3所述的下游引物，7μl ddH₂O，10μl qPCR扩增荧光染料Mix；

所述第二程序为：95℃预变性10s，然后以95℃反应15s、60℃反应30s、72℃反应40s进行40个循环，以95℃反应5s、65℃反应1min、37℃反应1min，最后终止反应。

7.权利要求3所述的特异性扩增引物在制备用于乳腺癌筛查的试剂盒中的应用。

8.一种用于乳腺癌筛查的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的特异性扩增引物。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反转录酶、缓冲液、ddH₂O、DNA聚合酶、荧光染料和dNTP混合液中的至少一种。