[发明专利]一种环状RNA hsa-circ-0044506及其特异性扩增引物和应用

说明书

本发明公开了一种环状RNA hsa‑circ‑0044506及其特异性扩增引物和应用，其中，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其在乳腺癌组织细胞以及患有乳腺癌患者的血液中高表达，可以作为筛查乳腺癌的分子标志物；本发明还提供一种用于扩增所述环状RNA的特异性扩增引物，所述特异性扩增引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；本发明还公开了所述特异性扩增引物在制备用于乳腺癌筛查的试剂盒中的应用及包括所述特异性扩增引物的试剂盒。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，尤其涉及一种用于乳腺癌诊断的环状RNA，用于所述环状RNA的特异性扩增引物及应用。

背景技术

乳腺癌是一种常见的女性高危恶性肿瘤，严重影响人们的生活质量。近年来，全世界的女性癌症患者中大约有22.9％为乳腺癌患者，新发现的乳腺癌患者中，中国患者占12.2％。尽管在药物敏感性和外科技术上已有巨大的突破，乳腺癌的复发和转移仍频繁地发生，成为晚期乳腺癌患者死亡的主要原因。早期诊断、早期治疗能够大大减少乳腺癌恶化的进一步发生，随着分子水平的发展以及对乳腺癌发生、发展、治疗相关机制的进一步研究，对靶向诊断和靶向治疗分子标志物的筛选和研究成为乳腺癌研究最受关注的领域之一。

环状RNA(Circular RNA，circRNA)是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子，主要由前体RNA(pre-mRNA)通过可变剪切加工产生。circRNA大多数定位于细胞质中，少数定位于细胞核内，大多数由外显子形成。circRNA不易被核酸外切酶降解，与线性RNA相比能更稳定地存在于生物体内，其在不同的物种中具有保守性，同时在不同组织及发育阶段具有表达特异性，大多数circRNA在不同的物种间含量丰富且都具有组织特异性，在人体组织、唾液、血液和外泌体中都有稳定表达，这使得circRNA成为肿瘤患者诊断、治疗和预后追踪的理想生物标志物。

近年来，关于circRNA与肿瘤之间的关系研究已有很多报道，已经明确circRNA具有调节肿瘤细胞增殖、凋亡、血管形成、代谢以及耐药等功能。Zhang等通过对不同泌乳时期的两组老鼠的乳腺组织进行circRNA芯片检测，发现circRNA在不同泌乳期老鼠乳腺组织中的表达有很大差异，两个时期检测到circRNA种类大多数不同。因此，circRNA可能是乳腺癌精准诊疗的新靶点，发现和筛选乳腺癌相关的circRNA标志物，对早期防治乳腺癌具有重要的意义和价值。

发明内容

本申请的目的在于提供以下几个方面：

第一方面，本申请提供一种环状RNA，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，起始两个核苷酸与最末两个核苷酸为成环结合位点。

所述环状RNA在circ-RNA数据库中的全称为hsa-circ-0044506，简称circ-0044506，定位于人类17号染色体反义链48261456-48269247区域，由COL1A1基因外显子(exon)31-50区剪切环化而成。

图1为所述环状RNA的基因结构图，如图1所示，所述环状RNA circ-0044506的序列全长3773bp，其中，CDS为蛋白质编码区。

根据本申请的第二方面，提供本发明第一方面所述环状RNA circ-0044506作为筛查乳腺癌的分子标志物的用途。

通过生物信息学预测，发明人发现环状RNA circ-0044506的应答原件miR-21，该基因能够通过PDCD4/MAPK信号通路影响肿瘤细胞凋亡。

并且，本发明研究发现相对于乳腺癌患者癌旁正常组织，环状RNA circ-0044506在乳腺癌组织中显著上调；在血液样本中，相对健康人群，环状RNA circ-0044506在乳腺癌患者血液中也显著上调。