[发明专利]检测口蹄疫O型广西株抗原的酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种特异性定量检测口蹄疫O型广西株抗原的酶联免疫试剂盒，包括可以与口蹄疫O型广西株146S抗原特异性结合的单克隆抗体作为捕获抗体包被的酶联反应板和酶标抗体；所述酶标抗体为用可以与口蹄疫O型广西株146S抗原特异性结合的单克隆抗体作为检测抗体制成的酶标抗体；所述捕获抗体含有重链可变区1E10-V_H和轻链可变区1E10-V_L；所述重链可变区1E10-V_H和轻链可变区1E10-V_L均由决定簇互补区和框架区组成；

所述1E10-V_H和所述1E10-V_L的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；

所述1E10-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第26~35位氨基酸所示；

所述1E10-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第53~60位氨基酸所示；

所述1E10-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第96~110位氨基酸所示；

所述1E10-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第24~36位氨基酸所示；

所述1E10-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第50~59位氨基酸所示；

所述1E10-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第94~99位氨基酸所示；

所述检测抗体含有重链可变区7G2-V_H和轻链可变区7G2-V_L，所述7G2-V_H和所述7G2-V_L的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；

所述7G2-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第25~34位氨基酸所示；

所述7G2-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第51~58位氨基酸所示；

所述7G2-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第98~114位氨基酸所示；

所述7G2-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第24~35位氨基酸所示；

所述7G2-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第49~58位氨基酸所示；

所述7G2-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第95~98位氨基酸所示。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括抗原标准品，所述抗原标准品为口蹄疫O型广西株146S抗原；所述口蹄疫O型广西株为口蹄疫O型广西株O/GX/09-7株。

3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述1E10-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1~126位所示；所述1E10-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ IDNo.2的第1~116位所示；

所述7G2-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.3的第1~128位所示；所述7G2-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4的第1~115位所示。

4.根据权利要求3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶联反应板的获得方法是将捕获抗体溶于100μl的 pH 9.6的碳酸盐溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶联反应板，每孔100ng~1000ng特异性单克隆抗体1E10，2~8℃下放置8~12小时，使捕获抗体与酶联反应板充分结合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS缓冲液，37℃封闭处理2~3小时，甩干后，待酶联反应板干燥后4℃密封保存。