[发明专利]检测口蹄疫O型广西株抗原的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性定量检测口蹄疫O型广西株抗原的酶联免疫试剂盒及其应用。该试剂盒包括可以与口蹄疫O型广西株146S抗原特异性结合的单克隆抗体作为捕获抗体包被的酶联反应板和酶标抗体。采用口蹄疫O型广西株(O/GX/09‑7株)的两株特异性单克隆抗体制成的双抗体夹心法酶联免疫定量检测试剂盒，利用本发明试剂盒进行检测与目前口蹄疫其他毒株均不发生交叉反应，灵敏度高、特异性强，可以有效地区分并检测样品中口蹄疫O型广西株(O/GX/09‑7株)抗原的含量。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种特异性定量检测口蹄疫O型广西株抗原的酶联免疫检测试剂盒，适用于口蹄疫O型广西株抗原的特异、快速、准确检测。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的一种烈性传染病。口蹄疫的致死率很低，但是感染率很高。发病的主要症状为：口腔粘膜、舌、唇、鼻镜、蹄叉、乳头等部位发生水疱，破溃形成烂斑，病畜蹄痛卧地、严重者蹄壳边缘溃裂或脱壳。不同动物的症状稍有不同，妊娠母牛可能流产，而后导致繁殖力降低；猪则以破蹄为最主要症状；山羊和绵羊的症状通常比牛温和。口蹄疫传染性高，传播迅速，感染猪、牛、羊等牲畜常导致幼畜死亡，成年动物生产能力急剧下降，严重危害畜牧业的发展和畜产品的生产供应。由于其在世界范围内广泛分布，能感染70多种家养和野生动物，且发病率极高(约为100％)，严重影响畜牧业生产和国际贸易，因而受到各国的高度重视，被世界动物卫生组织(Office International DesEpizooties,OIE)列为法定报告动物疫病。

口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科(picornavi-ridae)，口蹄疫病毒属(aphthovirus)的成员，由一条长约8500个核苷酸的单股、正链RNA和衣壳蛋白组成。病毒衣壳由4种结构蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成，其中VP1和VP3是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒(FMDV)具有多型性、易变性等特点，具有7个血清型，分别为A、O、C、SATI、SATII、SATIII及AsiaI型，各型之间无交叉保护反应。目前国内主要流行的是O型、A型(A/WH/09株)和亚洲1型(JSL/06株)。O型包括多个流行毒株，分别是新疆株(O/Mya98/XJ/2010株)、白云株(O/Mya98/BY/2010株)、OZK株(OZK/93株)、广西株(O/GX/09-7株)，其中广西株(O/GX/09-7株)在国内广泛流行。快速准确地对广西株(O/GX/09-7株)进行鉴定及检测，有助于口蹄疫的诊断以及在疫苗生产过程中的质量控制。

目前测定口蹄疫146S抗原的方法主要有蔗糖密度梯度离心，但该方法操作复杂，需要3天时间完成，耗时较长，且不能区分血清型。目前国内市售的口蹄疫疫苗多为多价苗，这意味着该疫苗中含有多种毒株或血清型，如中牧实业股份有限公司兰州生物药厂生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗含有2种口蹄疫O型抗原，分别为新疆株(O/Mya98/XJ/2010株)和广西株(O/GX/09-7株)，对每种抗原进行准确定量是保证疫苗安全有效的重要手段，而密度梯度离心法无法对口蹄疫的不同血清型进行区分，更无法对同一血清型不同毒株进行区分，因而，需要开发一种更为特异，灵敏、准确和可靠的检测方法来对口蹄疫不同血清型和毒株进行区分。