[发明专利]检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法在审
| 申请号： | 201811508740.0 | 申请日： | 2018-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN109355361A | 公开（公告）日： | 2019-02-19 |
| 发明（设计）人： | 张蓬;刁俊述;俞方;汤清斌;陈惠琴 | 申请（专利权）人： | 重庆芯超医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 成都时誉知识产权代理事务所(普通合伙) 51250 | 代理人： | 何悦 |
| 地址： | 400050 重庆*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 扩增 基因突变位点 苯丙酮尿症 末端碱基 测位 高保真DNA聚合酶 野生型碱基 碱基测序 碱基互补 扩增效率 凝胶电泳 荧光物质 点突变 突变型 野生型 种检测 荧光 自带 匹配 检测 检验 | ||
1.一种检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法，其特征在于：
制得检测Y204C、R243Q、Y356X和R413P四个位点的四组引物，
其中，Y204C突变位点的引物碱基序列为：
野生型引物F1：5’-CCTTGTATAAAACCCATGCTTGCTA-3’；
突变型引物F2：5’-CCTTGTATAAAACCCATGCTTGCTG-3’；
共同下游引物R：5’-CCATTGACCCTGATGTGGACT-3’；
R243Q突变点位的引物碱基序列为：
野生型引物F1：5’-ACTGGTTTCCGCCTCCG-3’；
突变型引物F2：5’-ACTGGTTTCCGCCTCCA-3’；
共同下游引物R：5’-TACTCACGGTTCGGGGGTAT-3’；
Y356X突变点位的引物碱基序列为：
野生型引物F1：5’-TTTCACTTGGGGCCTACAGTAC-3’；
突变型引物F2：5’-TTTCACTTGGGGCCTACAGTAA-3’；
共同下游引物R：5’-AGCTAGTGGCTCACCTTTGTC-3’；
R413P突变点位的引物碱基序列为：
野生型引物F1：5’-TCGGCCCTTCTCAGTTCG-3’；
突变型引物F2：5’-TCGGCCCTTCTCAGTTCC-3’；
共同下游引物R：5’-AAACCGAGTGGCCTCGTAAG-3’；
针对上述各个突变位点，将待检测的样本DNA分别采用对应的引物进行realtime-PCR扩增并获取荧光数据，以判断各位点的情况。
2.根据权利要求1所述的检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法，其特征在于：在realtime-PCR扩增反应中，先进行预变性，再进行35次的变性和退火循环。
3.根据权利要求2所述的检测苯丙酮尿症基因突变位点的方法，其特征在于：预变性条件中时间为10分钟，温度为95℃；
变性条件中时间为15秒，温度为95℃；
退火条件中时间为1分钟，温度为66℃。
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