[发明专利]一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法

权利要求书

1.一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法，其包括如下步骤：构建一种质粒或病毒表达体系，所述表达体系转染或感染细胞后表达含有信号肽、IgG结合区和C-末端跨膜区结构的蛋白；所述抗体与所述蛋白相结合而展现于细胞表面。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：筛选抗体表达细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述表达体系为pLVX-Puro-TET ON载体。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述pLVX-Puro-TET ON载体是在PLVX-Puro载体的位点XhoI和EcoRI之间插入TET操纵子序列得到。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体。

6.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述抗体为多克隆抗体。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)构建病毒表达体系，所述表达体系携带编码含有信号肽、IgG结合区和C-末端跨膜区结构的protein A/G的cDNA序列；

2)制备重组病毒悬液，收集重组病毒颗粒；

3)筛选抗体表达细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述3)筛选抗体表达细胞，包括如下步骤：

(1)稳定表达细胞表面protein A/G的骨髓瘤细胞株的建立：将重组病毒颗粒感染骨髓瘤细胞，利用嘌呤霉素抗性筛选得到稳定表达protein A/G的骨髓瘤细胞株；

(2)protein A/G表达的骨髓瘤细胞株与抗体表达细胞的融合：将protein A/G表达的骨髓瘤细胞株与特定抗原免疫后的小鼠脾脏B细胞融合并培养12小时，移去培养液，用PBS洗两遍，再加含四环素或强力霉素的细胞培养培养4-8小时，然后将细胞收集于离心管中；

(3)抗原磁珠与抗体表达细胞的结合：将交联有抗原的磁珠加进步骤(2)收集有细胞的离心管中轻摇半小时，在磁场条件下洗去未与磁珠结合的细胞；

(4)用抗原洗脱细胞并进行混合或单克隆化培养：将所收集细胞在不含有四环素和强力霉素的培养液中培养，然后进行多克隆抗体检测和单克隆优化细胞株的筛选；

(5)鉴定和保存细胞株。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述cDNA序列可设有表达开关。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述开关为四环素控制开关。