[发明专利]一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了提供了一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法。该方法主要通过对抗体表达细胞引入并表达带有抗体结合能力的蛋白A/G相关的cDNA序列，该序列表达物是一种含信号肽、IgG结合区和跨膜区的蛋白质。该蛋白质与抗体分子的复合物最终随囊泡转运至质膜后，便会出现于细胞表面。利用抗原与抗体的特异性结合，筛选到相应的分泌细胞。本发明能够避免常规单抗筛选中的繁琐的多孔平板培养、检测和筛选过程，不需要抗性条件，大幅节省时间和人力物力，缩短抗体制作周期。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法。

背景技术

抗体是指抗原刺激机体后，由B淋巴细胞或浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。其中，由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体，简称单抗。它具有特异性强、纯度高、均一性好等优点。第一代单抗由Kohler和Milstein在1975年制备，它是来源于小鼠B细胞杂交瘤的抗绵羊红细胞的单克隆抗体。近年来，随着研究的不断深入，越来越多的单克隆抗体药物被发掘并应用于治疗肿瘤、病毒性感染、心血管病以及其它疾病，尤其是在肿瘤免疫治疗中显示出良好的前景。

单克隆抗体与抗血清(又称多克隆抗体，多抗)的主要差别是单抗为单一B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白分子。最常用的单抗是小鼠的单克隆抗体，制备单克隆抗体的技术又称杂交瘤技术。杂交瘤技术的基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交，经筛选得到既能分泌抗体又有瘤细胞的特性的杂交瘤细胞。用单克隆化的杂交瘤细胞就可以进行单克隆抗体的生产，目前较常见的为鼠单抗，兔单抗和其它物种单抗也已逐渐开始生产但仍未形成规模。

小鼠的单抗技术虽然已经很成熟，但其多孔平板培养与检测等筛选过程比较繁琐，周期较长。过多的步骤还可能会导致抗体筛选质量的下降，从而最终影响筛选结果的好坏。本发明的特点是通过引入新技术，优化和简化单克隆抗体筛选过程，缩短筛选时间，提高筛选质量，为单抗筛选提供全新模式，为目前单抗筛选方法提供简化与优化手段，为难以进行的其他动物及人单克隆抗体的制备提供有力的技术支撑。

发明内容

针对现有技术的不足及实际需求，本发明提供了一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法，该方法能够大大缩短筛选周期，省时省力，能显著提高工作效率。

本发明要解决的技术问题通过以下技术方案得以实现：

一种细胞表面展现式快速筛选抗体表达细胞的方法，其包括如下步骤：构建一种质粒或病毒表达体系，所述表达体系转染或感染细胞后表达含有信号肽、IgG结合区和C-末端跨膜区结构的蛋白；所述抗体与所述蛋白相结合而展现于细胞表面。

进一步地，

所述方法进一步包括：

筛选抗体表达细胞，通过荧光标记或磁珠交联的抗原与抗体结合的方法筛选抗体的分泌细胞。

优选地，

所述表达体系为pLVX-Puro-TET ON载体。

优选地，

所述pLVX-Puro-TET ON载体是在PLVX-Puro载体的位点XhoI和EcoRI之间插入TET操纵子序列得到。

优选地，

所述抗体为单克隆抗体。

优选地，

所述抗体为多克隆抗体。

进一步地，

所述方法包括如下步骤：